【摘 要】
：
目的:检测Nek2蛋白（中心体相关蛋白激酶2,NIMA相关激酶2）在正常乳腺组织、乳腺纤维瘤组织及Luminal A型乳腺癌组织中的表达,分析Nek2蛋白在Luminal A型乳腺癌组织中的表达情况及其与临床病理特征的相关关系;体外低表达NEK2蛋白后,通过一系列细胞实验,探究NEK2蛋白对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡过程中的相关影响。方法:1、采用免疫组化IHC染色实验检测20例正
论文部分内容阅读
目的:检测Nek2蛋白（中心体相关蛋白激酶2,NIMA相关激酶2）在正常乳腺组织、乳腺纤维瘤组织及Luminal A型乳腺癌组织中的表达,分析Nek2蛋白在Luminal A型乳腺癌组织中的表达情况及其与临床病理特征的相关关系;体外低表达NEK2蛋白后,通过一系列细胞实验,探究NEK2蛋白对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡过程中的相关影响。方法:1、采用免疫组化IHC染色实验检测20例正常乳腺组织,20例乳腺纤维瘤组织及60例Luminal A型乳腺癌组织中Nek2蛋白的表达情况,分析NEK2蛋白的表达与Luminal A型乳腺癌临床病理特征的相关关系;2、通过RNA干扰技术在乳腺癌MCF-7细胞中转染3条针对NEK2蛋白的si RNA（小干扰RNA）干扰质粒沉默目的基因,转染空白质粒为阴性对照,并设计空白对照;3、采用RT-PCR及Western Blot实验分别在转录及蛋白水平检测各组细胞NEK2的表达情况,筛选出效率最好的低表达细胞株进行下一步实验;4、设立实验对照:空白组、阴性对照组（si-NC组）、低表达组（si-NEK2组）;5、采用CCK-8增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕迁移实验、流式凋亡实验检测各组细胞增殖、侵袭、迁移和调亡能力;6、采用Western blot实验检测各组细胞中E-cadherin蛋白、vimentin蛋白、slug蛋白的表达水平。结果:1、免疫组化IHC染色实验:NEK2蛋白在Luminal A型乳腺癌组织中的表达明显高于正常乳腺组织和乳腺纤维瘤组织（P＜0.05）;NEK2蛋白在Luminal A型乳腺癌组织中的表达与组织学分级、淋巴结转移、脉管转移相关（P＜0.05）,而与年龄、肿瘤直径、有无绝经史无明显相关性,差异不具有统计学意义（P＞0.05）。2、RT-PCR实验提示:3个实验组si-NEK2-1组、si-NEK2-2组以及si-NEK2-3组NEK2分子m RNA表达水平均显著降低（P＜0.05）,其中以si-NEK2-3组差异最为显著（P＜0.001）。3、Western Blot实验:低表达组（si-NEK2组）中NEK2蛋白表达明显低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。4、CCK-8增殖实验提示:低表达组（si-NEK2组）在第24h和第48h的OD值明显低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。5、Transwell侵袭实验提示:低表达组（si-NEK2组）中的上室外表面细胞数量明显低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。6、划痕迁移实验提示:低表达组（si-NEK2组）中的划痕宽度明显小于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。7、流式细胞学凋亡实验提示,低表达组（si-NEK2组）中癌细胞凋亡坏死率明显高于空白组、阴性对照组（P＜0.05）。8、Western Blot实验检测三种蛋白提示:低表达组（si-NEK2组）中上皮标志物E-cad表达明显高于空白组和阴性对照组,间质表达物vimentin、锌指转录蛋白slug（又名Snail2）表达明显低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。结论:1、NEK2在Luminal A型乳腺癌中高表达,且与组织学分级、淋巴结转移和脉管转移相关。2、在乳腺癌MCF-7细胞中低表达NEK2可抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡;可能通过促进E-cadherin的表达,抑制vimentin、锌指转录蛋白slug的表达抑制细胞增殖、侵袭和迁移。
其他文献
目的:探讨分泌性糖蛋白DKK1（Dickkopf-1）mRNA在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌患者的预后价值。方法:1.运用STRING数据库对与DKK1相互作用的蛋白质进行蛋白-蛋白之间相互作用分析,并使用Metascape数据库进一步进行GO（gene ontology）功能富集分析,了解它们之间相互作用的功能范畴;2.运用Kaplan-Meier plotter数据库和GEPIA数据库在线绘制K
作为我国教育事业中的关键组成部分,幼儿教育的基础性比较明显,主要以养成教育和启蒙教育为重点,以促进幼儿的健康成长及发展为基本目标,确保幼儿能够拥有一个快乐健康的童年。新时代背景下的幼儿教育产生了翻天覆地的变化,摆脱了传统幼儿教育的束缚,开始朝着现代化的方向发展,整体的教育质量和水平提升比较明显。许多幼儿园着眼于幼儿的生活自理能力调整育人思路及方向,确保幼儿能够实现自我管理,养成良好的卫生习惯,具备
目的:以二甲双胍（MET）为参照药物,分析艾塞那肽（EX）对多囊卵巢综合征（PCOS）患者的生殖功能的影响及安全性,为临床治疗PCOS伴不孕症患者提供策略。方法:通过预先制定的检索策略检索中国知网、万方、维普网、Pub Med、Embase、Cochrane Library数据库,检索艾塞那肽治疗多囊卵巢综合征的随机对照试验（RCT）,检索时限均为建库至2022年2月。由2名研究者独立进行文献筛选
目的:该研究旨在对比单侧双通道脊柱内镜（Unilateral Biportal Endoscopy,UBE）与单通道脊柱内镜（Uniportal Endoscopy,UE）下单侧椎板切开双侧减压术治疗（Unilateral Laminotomy for Bilateral Decompression,ULBD）腰椎管狭窄症的短期临床疗效与影像学方面的差异,探讨UBE下单侧椎板切开双侧减压术治疗腰椎
目的:探讨芹黄素对大鼠肝细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）模型的损伤及AKT/e NOS通路的影响。方法:将BRL3A细胞分为3组,分别为控制组、H/R组、H/R+芹黄素组,H/R+芹黄素组加入芹黄素预处理,然后H/R组以及H/R+芹黄素组进行H/R处理。通过CCK-8检测细胞活性,用流式细胞术检测细胞凋亡,用ELISA法检测TNF-α、IL-1β水平,同时检测S
背景:复苏性主动脉球囊阻断术（REBOA）可预防致死性出血。但在战场或野外等无透视条件下可能导致无法实施,因此能否依据体表标志确定球囊导管置入长度,以及确定球囊置入的安全参数,以便为临床中在无透视情况下安全实施球囊置入提供依据显得尤为重要。目的:搜集衡阳及其周边地区人群的数据并进行统计学分析,依据体表标志确定球囊的置入位置及安全参数,提高置入的准确率及安全性。方法:对南华大学附属第二医院2021年
目的:通过收集、整理冠心病心衰患者的临床资料,分析系统免疫炎症指数（SII）与冠心病心衰患者的预后相关性,并基于SII建立冠心病心衰患者预后预测模型,预测冠心病心衰患者出院后的生存率。方法:筛选2019年12月至2021年6月在南华大学附属第二医院心内科住院的冠心病慢性心力衰竭患者139例,为实验组,同时筛选同期我院健康体检者139例,为对照组。采集患者入院时的一般资料、血常规、血生化、心功能分级
目的:冠心病是威胁人类健康的主要杀手之一,作为冠心病中最为严重类型的急性冠脉综合征（ACS）,其发生发展离不开炎症反应、脂质代谢异常以及血栓形成的共同作用,本研究探讨平均血小板体积/高密度脂蛋白比值（MPVHR）与ACS患者冠脉病变严重程度的相关性,同时联合MPVHR与中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）探讨联合指标在预测ACS患者冠脉病变严重程度方面的价值。方法:入选2020年11月至2021年8
目的:研究FBXO11与NDRG2蛋白在结肠腺癌组织及相应癌旁组织中的表达情况,探讨两个蛋白与结肠腺癌各个临床病理参数之间有无密切联系及其联合检测有无临床意义,以求寻找新的结肠癌相关诊断生物标志物。方法:随机选择2020年12月-2021年12月于南华大学附属第二医院行外科手术切除所得并且病理检查结果证实为结肠腺癌的组织标本41例及其相应癌旁组织标本41例,运用免疫组化法测定FBXO11和NDRG
目的:通过建立大鼠肝缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）模型,研究芹黄素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用,并初步探究芹黄素是否通过Akt/e NOS信号通路及其相关机制发挥作用,为临床肝缺血再灌注损伤的防治提供进一步的理论基础。方法:建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型,雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组（Sham组）,肝缺血再灌注组（IR组）和芹黄素预处理组（AP组）。AP组造