论文部分内容阅读
目的：
通过临床病例收集，观察建中理劳汤对慢性肾衰竭脾肾气虚兼瘀浊证患者的临床疗效和安全性评价，并通过实验研究，从miR-192调控TGF-β1/Smads通路观察建中理劳汤对UUO模型小鼠肾间质纤维化的干预作用，探讨其作用机制，为临床应用中医药延缓慢性肾衰竭进程提供进一步的诊疗思路。
方法：
（1）临床研究：将符合纳入标准和排除标准的60例临床病例随机分为对照组和试验组各30例，对照组给予西医对症治疗加尿毒清颗粒，试验组在西医治疗的基础上，予以建中理劳汤加减治疗，观察疗程均为8周。对比两组治疗前、治疗4周后、治疗8周后的Scr、BUN、BUA、eGFR、HB、ALB、尿蛋白/肌酐、肝功能，以及中医症候积分和疗效的变化。
（2）实验研究：将120只SPF级6-8周龄C57BL/6J雄性小鼠适应性饲养一周后随机分为假手术组（Sham组）20只，造模组100只。造模组行右侧输尿管结扎术（UUO）后随机分为UUO组、尿毒清组、建中理劳汤低中高剂量组，Sham组只游离右侧输尿管不结扎。造模术后3天开始干预治疗，尿毒清组予以尿毒清颗粒5g/Kg/d，建中理劳汤低中高剂量组予以中药汤剂2.15g/Kg/d、4.3g/Kg/d、8.6g/Kg/d，0.1ml/10g/d，连续灌胃28d。实验过程记录小鼠一般情况和体重。分别于灌胃后第14d、21d、28d腹主动脉取血进行Scr和BUN检测，处理右肾组织，RT-PCR法检测TGF-β1和miR-192，Western Blot法检测Smad3和Smad7蛋白，免疫组化法检测α-SMA和COLIV，HE和Masson染色观察肾脏病理改变和肾间质纤维化程度。
结果：
（1）临床研究：试验组临床应用安全，可改善患者倦怠乏力、食少纳呆、腹胀等症状，在降低血肌酐、尿素氮、尿酸，升高肾小球滤过率，降低尿蛋白，改善中医症状以及中医临床疗效方面与对照组相比有明显优势（P＜0.05、P＜0.01），但在升高血红蛋白、血清白蛋白方面两组治疗效果无明显差异。
（2）实验研究：①建中理劳汤组可改善小鼠一般情况，延缓体重下降。②UUO组的Scr、BUN含量明显高于其他各组，有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01），其中建中理劳汤各组降低Scr、BUN的疗效在治疗后期优于尿毒清组，以高剂量组最明显。③RT-PCR结果显示：Sham组的TGF-β1表达最少，miR-192的表达最多；各时间段UUO组的TGF-β1明显高于其余各组（P＜0.01）且持续上升，miR-192在造模14d后开始持续下降并逐渐低于给药组（P＜0.01）；与UUO组比较，给药组可不同程度抑制TGF-β1的上升，升高miR-192的表达；与尿毒清组比较，中药各组的TGF-β1更低且上升更为缓慢（P＜0.01），以高剂量组的表达量最少；miR-192的表达量略高，以低剂量组最明显（P＜0.01）。④Western Blot结果显示：Sham组中，各时间段内Smad3蛋白表达最低，Smad7蛋白表达最高；UUO组Smad3蛋白逐渐上升（P＜0.01），Smad7蛋白逐渐下降（P＜0.01）；与UUO组比较，中药各剂量组能抑制Smad3蛋白的升高（P＜0.01），促进Smad7蛋白的表达（P＜0.01），并逐渐呈剂量依赖性。⑤免疫组化检测α-SMA和COLIV结果显示：Sham组仅少量表达，UUO组在肾小管上皮细胞和肾间质中的表达量随时间明显增加，阳性染色面积逐渐加深，与同期Sham组比较有统计学意义（P＜0.01）；与UUO组比较，中药各剂量组的表达量减少（P＜0.05），但高于同期Sham组。⑥HE染色显示：Sham组肾脏外观形态正常，无病理改变；其余各组右肾体积增大，包膜变薄紧张成半透明状，肾实质被积水压迫变薄，肾皮质及肾组织模糊，病理染色显示肾盂逐渐扩张，肾实质变窄，肾小管管腔狭窄、数量减少、体积缩小，间质大量结缔组织增生，肾小管和肾小球扩张，上皮细胞水肿，肾间质纤维化逐渐加重；给药组上述情况均有改善，以建中理劳汤中、高剂量组较为明显。⑦Masson染色显示：与Sham组比较，UUO组肾间质内蓝色胶原纤维沉积面积明显增加，肾间质纤维化评分显著升高（P＜0.01），且随时间延长加重；各给药组较UUO组减轻。
结论：
（1）建中理劳汤对于慢性肾衰竭脾肾气虚兼瘀浊证患者，应用健脾补肾、祛瘀化浊法中药治疗，在保护患者肾功能、改善临床疗效和临床症状方面效果良好。
（2）建中理劳汤可延缓UUO模型小鼠肾间质纤维化的进展，推测是通过抑制TGF-β1/Smads信号通路，升高miR-192的表达来实现的。
通过临床病例收集，观察建中理劳汤对慢性肾衰竭脾肾气虚兼瘀浊证患者的临床疗效和安全性评价，并通过实验研究，从miR-192调控TGF-β1/Smads通路观察建中理劳汤对UUO模型小鼠肾间质纤维化的干预作用，探讨其作用机制，为临床应用中医药延缓慢性肾衰竭进程提供进一步的诊疗思路。
方法：
（1）临床研究：将符合纳入标准和排除标准的60例临床病例随机分为对照组和试验组各30例，对照组给予西医对症治疗加尿毒清颗粒，试验组在西医治疗的基础上，予以建中理劳汤加减治疗，观察疗程均为8周。对比两组治疗前、治疗4周后、治疗8周后的Scr、BUN、BUA、eGFR、HB、ALB、尿蛋白/肌酐、肝功能，以及中医症候积分和疗效的变化。
（2）实验研究：将120只SPF级6-8周龄C57BL/6J雄性小鼠适应性饲养一周后随机分为假手术组（Sham组）20只，造模组100只。造模组行右侧输尿管结扎术（UUO）后随机分为UUO组、尿毒清组、建中理劳汤低中高剂量组，Sham组只游离右侧输尿管不结扎。造模术后3天开始干预治疗，尿毒清组予以尿毒清颗粒5g/Kg/d，建中理劳汤低中高剂量组予以中药汤剂2.15g/Kg/d、4.3g/Kg/d、8.6g/Kg/d，0.1ml/10g/d，连续灌胃28d。实验过程记录小鼠一般情况和体重。分别于灌胃后第14d、21d、28d腹主动脉取血进行Scr和BUN检测，处理右肾组织，RT-PCR法检测TGF-β1和miR-192，Western Blot法检测Smad3和Smad7蛋白，免疫组化法检测α-SMA和COLIV，HE和Masson染色观察肾脏病理改变和肾间质纤维化程度。
结果：
（1）临床研究：试验组临床应用安全，可改善患者倦怠乏力、食少纳呆、腹胀等症状，在降低血肌酐、尿素氮、尿酸，升高肾小球滤过率，降低尿蛋白，改善中医症状以及中医临床疗效方面与对照组相比有明显优势（P＜0.05、P＜0.01），但在升高血红蛋白、血清白蛋白方面两组治疗效果无明显差异。
（2）实验研究：①建中理劳汤组可改善小鼠一般情况，延缓体重下降。②UUO组的Scr、BUN含量明显高于其他各组，有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01），其中建中理劳汤各组降低Scr、BUN的疗效在治疗后期优于尿毒清组，以高剂量组最明显。③RT-PCR结果显示：Sham组的TGF-β1表达最少，miR-192的表达最多；各时间段UUO组的TGF-β1明显高于其余各组（P＜0.01）且持续上升，miR-192在造模14d后开始持续下降并逐渐低于给药组（P＜0.01）；与UUO组比较，给药组可不同程度抑制TGF-β1的上升，升高miR-192的表达；与尿毒清组比较，中药各组的TGF-β1更低且上升更为缓慢（P＜0.01），以高剂量组的表达量最少；miR-192的表达量略高，以低剂量组最明显（P＜0.01）。④Western Blot结果显示：Sham组中，各时间段内Smad3蛋白表达最低，Smad7蛋白表达最高；UUO组Smad3蛋白逐渐上升（P＜0.01），Smad7蛋白逐渐下降（P＜0.01）；与UUO组比较，中药各剂量组能抑制Smad3蛋白的升高（P＜0.01），促进Smad7蛋白的表达（P＜0.01），并逐渐呈剂量依赖性。⑤免疫组化检测α-SMA和COLIV结果显示：Sham组仅少量表达，UUO组在肾小管上皮细胞和肾间质中的表达量随时间明显增加，阳性染色面积逐渐加深，与同期Sham组比较有统计学意义（P＜0.01）；与UUO组比较，中药各剂量组的表达量减少（P＜0.05），但高于同期Sham组。⑥HE染色显示：Sham组肾脏外观形态正常，无病理改变；其余各组右肾体积增大，包膜变薄紧张成半透明状，肾实质被积水压迫变薄，肾皮质及肾组织模糊，病理染色显示肾盂逐渐扩张，肾实质变窄，肾小管管腔狭窄、数量减少、体积缩小，间质大量结缔组织增生，肾小管和肾小球扩张，上皮细胞水肿，肾间质纤维化逐渐加重；给药组上述情况均有改善，以建中理劳汤中、高剂量组较为明显。⑦Masson染色显示：与Sham组比较，UUO组肾间质内蓝色胶原纤维沉积面积明显增加，肾间质纤维化评分显著升高（P＜0.01），且随时间延长加重；各给药组较UUO组减轻。
结论：
（1）建中理劳汤对于慢性肾衰竭脾肾气虚兼瘀浊证患者，应用健脾补肾、祛瘀化浊法中药治疗，在保护患者肾功能、改善临床疗效和临床症状方面效果良好。
（2）建中理劳汤可延缓UUO模型小鼠肾间质纤维化的进展，推测是通过抑制TGF-β1/Smads信号通路，升高miR-192的表达来实现的。