鸡传染性贫血病病毒（Chicken infectious anaemia virus,CIAV）是鸡传染性贫血病的病原体。由于缺乏有效监测技术与防控措施,当前CIAV在世界各地的家禽养殖场普遍存在。CIAV感染可引起雏鸡再生障碍性贫血、免疫抑制和全身淋巴萎缩,继发感染,对全球养禽业造成了巨大的经济损失。为建立有效的CIAV检测技术,本研究在开展CIAV分离鉴定的基础上,制备了CIAV核酸定性标准样品,建立了基于多肽技术的检测CIAV抗体的间接ELISA方法,并对临床样品进行了初步应用。研究结果为分析CIAV流行变异和传播趋势提供了依据,为CIAV病毒核酸检测提供了定性标准样品以及为临床监测CIAV感染与免疫提供了自主产权的间接ELISA检测技术。1.鸡传染性贫血病病毒的分离鉴定以及JSP1906株的序列分析本研究对江苏地区养殖场内送检的疑似鸡传染性贫血病病毒（CIAV）感染的6份病料,通过接种MDCC-MSB1细胞传代以及PCR检测进行了病原分离与鉴定。PCR结果表明6份病料以及由MDCC-MSB1细胞扩增传代样品均能扩增出CIAV特异性条带。对其中送检鸽子组织样品中分离到的CIAV病毒CIAV-JSP1906全基因测序发现,CIAV-JSP1906基因组大小为2298 bp。将其与GenBank上26株国内外不同地区的CIAV毒株进行对比发现,CIAV-JSP1906与吉林株（JL14023）的同源性最高,与巴西株（KY02457）和日本株（TR20）的同源性最低。与其他毒株比较,虽然CIAV-JSP1906的VP2和VP3蛋白高度保守,但是其VP1第394位点为谷氨酰胺（Q）,表明CIAV-JSP1906具有高致病性。进一步分析发现CIAV-JSP1906在非编码区150 bp～245 bp之间有4个21 bp的DR序列和12 bp的插入,具有典型的CIAV基因型。CIAV-JSP1906的成功分离鉴定与全基因测序为深入研究CIAV跨物种传播的分子流行情况提供了参考。2.鸡传染性贫血病病毒核酸定性标准样品的制备为获得可用的CIAV核酸定性标准样品,本研究将2019年10月20日从江苏省泰州兴化市送检病料中分离到的一株鸡传染性贫血病病毒CIAV-TZC1910,进行病毒纯粹性鉴定,然后在MDCC-MSB1细胞上大量扩增,CIAV-TZC1910全基因大小为2298 bp。根据《鸡传染性贫血诊断技术》（NY/T 1187-2019）行业标准的推荐,本研究采用实时荧光定量PCR方法,以pcDNA3.1-VP1真核质粒为标准曲线检测CIAV病毒DNA拷贝数,确定CIAV最佳稀释度和最佳灭活条件。最后对灭活后的病毒悬液进行分装保存,进行无支原体和无菌检验后,同时对CIAV核酸定性标准样品TZC1910进行均一性、稳定性以及保存时间等的标定,结果表明所制备的CIAV核酸定性标准样品TZC1910符合标准。CIAV核酸定性标准样品的获得,解决了该病在检测中缺乏核酸定性标准样品的实际问题,规范了CIAV核酸检测技术。3.鸡传染性贫血病抗体间接ELISA方法的建立与初步应用本研究通过软件分析CIAV经典毒株序列CUX-1,选择CIAV-VP1序列中高度保护的抗原性和亲水性较高的3段多肽序列作为包被抗原,同时在制备CIAV阳性鸡血清的基础上,建立了检测CIAV抗体的间接ELISA检测方法。通过反应条件优化确定了ELISA最佳反应条件及检测临界值,并开展了特异性、重复性测定以及与IDEXX的ELISA试剂盒对临床样品进行了比较检测。特异性试验表明该ELISA方法不与所检测的REV、AIV-H5/H9、ILTV、IBV、NDV以及ALV-A/J/K等多抗血清反应,仅与所检测的CIAV阳性多抗血清反应。重复性试验表明该ELISA方法批内重复变异系数以及批间重复变异系数CV值均小于10%。对临床CIAV免疫鸡群样品进行比对,检测结果发现该ELISA方法和IDEXX试剂盒的阳性检出率分别为94%和80.4%,该ELISA方法与IDEXX试剂盒的总符合率73.2%。以上基于多肽的检测CIAV抗体的ELISA方法的建立为CIAV免疫鸡群及感染鸡群提供了一种快速简便的监测CIAV抗体的血清学检测方法。