番茄（Solanum lycopersicum）是全球农业生产中最重要的蔬菜作物之一。在番茄的生产和运输过程中,许多病害都会严重威胁番茄的产量和质量,番茄枯萎病就是其中之一。近年来,由于防治效果好、防治时效长且环境友好等特点,通过生物代谢产物挖掘生物制剂来防治番茄病害已成为重要的防治策略。伯克氏菌是一种有益于环境保护和农业生产的细菌,对许多病原菌都有着极显著的拮抗效果,所以具有开发成生物制剂的潜力。为了解析伯克氏菌拮抗病原真菌的分子机制,本研究以洋葱伯克氏菌Burkholderia arboris（Ba1）和番茄枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici,Fol）为研究对象,获得以下结果:（1）初步分析了洋葱伯克氏菌Ba1产生的拮抗物质特性。通过对峙实验表明Ba1产生的拮抗物质可以显著抑制番茄枯萎病菌Fol真菌的生长。进一步提取了Ba1的粗提物对其进行热稳定性检测和蛋白酶K处理,发现拮抗物质热稳定性较高,且对蛋白酶K不敏感。（2）预测了Ba1拮抗物质的合成途径,构建敲除关键基因的Ba1突变体,发现突变体对Fol真菌拮抗能力并未减弱。首先,我们通过构建Ba1-m Cherry荧光菌株,确定了适合Ba1遗传转化的条件。其次,利用在线分析网站anti SMASH预测了Ba1的次级代谢产物基因簇,根据质谱鉴定的拮抗物质哌嗪二酮类化合物和吡咯并吡嗪酮类化合物的结构,确定了ent E、巨大质粒的第524个和第793个基因是其关键合成基因。最后,通过基因敲除构建了Ba1突变体,结果表明突变体并未减弱抑制Fol真菌生长的能力。（3）构建了Ba1的转座子插入突变体库,筛选获得了两个对Fol真菌拮抗能力减弱的突变体,克隆后发现突变基因分别编码Asn C家族转录调控因子和尿卟啉III甲基转移酶,其中尿卟啉III甲基转移酶突变使Ba1几乎丧失拮抗能力,敲除编码该蛋白的基因Cob A后也验证了这一结果。初步的基因功能分析表明其是钴胺素和西罗血红素合成途径中的重要基因。同时通过非靶向代谢组检测Ba1和突变体中具有显著性差异的代谢物,其中二甲基二硒醚（Dimethyl diselenide）、溶血磷脂酰乙醇胺（Lysophosphatidylethanolamine,LPE）以及一个短肽组氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸（His-Ala-Phe-Lys）在突变体中显著下调。综上所述,本研究对Ba1粗提物的性质进行了初步探索,通过构建Ba1次级代谢产物合成候选基因的突变体以及转座子突变体库,定位到了两个对Ba1拮抗物质有影响的基因,这为今后开发Ba1拮抗物质作为生防制剂的生产和使用提供了前期基础。