木薯块根采后生理腐烂的非靶向代谢组学研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xjfox1986
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木薯(Manihot esculenta Crantz)属于大戟科(Euphorbiaceae)植物,是一种重要的全球粮食、能源和饲料作物,与马铃薯、甘薯并称世界三大薯类作物。木薯块根收获后,在室温下不易于贮藏,1-3天就发生变质,在木薯块根的表皮和内部出现青褐变,叫做木薯采后生理腐烂(Post-harvest physiological deterioration,PPD)。PPD严重损害了农户们及加工企业的经济效益,是木薯产业化发展所要应对的重要问题之一。本研究以不同PPD程度的木薯块根为研究对象,观察PPD期间块根细胞结构变化,同时利用液相色谱质谱联用研究技术,采用多元统计等方法,筛选不同PPD程度木薯块根差异代谢物、代谢途径,并对其进行多元统计分析、单变量分析、火山图、KEGG注释、代谢通路等非靶向代谢组学分析,以期探究木薯块根PPD期间代谢物的变化规律,挖掘木薯块根PPD过程的关键代谢产物及代谢通路,为选育耐PPD的木薯新品种提供理论依据。主要研究结果如下:1、对常温贮存的采后0天、3天、6天、9天及12天的华南9号(SC9)木薯块根进行扫描电镜显微观察,发现木薯采后0天和3天块根中薄壁细胞几乎都比较完整,小淀粉粒聚积成念珠状环绕,随着木薯PPD程度加深,在采后第6天时,木薯薄壁细胞出现严重脱水皱缩,淀粉体被膜降解消失,不规则形态的淀粉粒被释放,淀粉粒散开,呈现棱角。2、代谢组学研究结果表明影响木薯块根PPD变化的重要差异代谢物主要有11种,包括:9(S)-HODE(9-羟基-10E,12Z-十八碳二烯酸)、12-OPDA(12-氧植物二烯酸)、9(S)-HpOTrE(9(S)-氢过氧-10E,12Z,15Z-十八碳三烯酸)、Scopoletin(东莨菪素)、Orotidine(乳清酸)、N1-(5-Phospho-a-D-ribosyl)-5,6-dimethylbenzimidazole(N1-(5-A-d-核糖基)-5-6-二甲基苯并咪唑)、7-Aminomethyl-7-carbaguanine(7-氨基甲基-7 氨基胍)、Epicatechin(表儿茶素)、S-Lactoylglutathione(S-乳谷胱甘肽)、Glutathione(谷胱甘肽)、Pantetheine(泛酰巯基乙胺),它们可作为木薯块根PPD的标记代谢物,其中在PPD过程中,Epicatechin(表儿茶素)和Scopoletin(东莨菪素)含量的变化最为显著。3、标记代谢物主要富集在11条代谢通路上,分别为:谷胱甘肽代谢通路、α-亚麻酸代谢通路、丙酮酸代谢通路、苯丙烷类生物合成通路、类黄酮生物合成通路、亚油酸代谢通路、泛酸和CoA生物合成途径、卟啉和叶绿素代谢通路、嘧啶代谢通路、苯丙氨酸代谢通路、叶酸生物合成通路。4、利用高效液相色谱技术对关键代谢物进行绝对含量的测定,(-)-Epigallocatechin(表没食子儿茶素)和L-Epicatechin(表儿茶素)的浓度随着PPD程度的变化出现显著增高,且L-Epicatechin浓度出现极显著提高。Cyanidin-3-O-glucoside(矢车菊素-3-O-葡萄糖苷)浓度先降低后显著提高,研究结果与代谢组学数据相符。5、从PPD关键代谢物Epicatechin(表儿茶素)所在的类黄酮代谢通路中挑选8个相关基因,包括 Anthocyanidin reeducate(ANR)、Leucoanthocyanidin reductase(LAR)、Leucoanthocyanidin reductase-like(LAR1)、Dihydroflavanol reductase(DFR)、Anthocyandin synthase(ANS)、Putative dihydroflavonol 4-reductase(PDFR)、Bifunctional dihydroflavonol 4-reductase(BDFR)、Flavanone 3-hydroxylase-like(F3H),从基因水平进行差异代谢物验证。qRT-PCR结果显示,ANR、LAR、LAR1、DFR、ANS随着木薯SC9块根PPD过程的变化,表达量显著提高,较严重PPD块根均呈现极显著性差异。PDFR随着木薯块根PPD过程的变化表达量也出现上调,差异显著。BDFR和F3H随着木薯块根PPD过程的变化,呈现出下调趋势,差异显著。它们的检测结果与代谢组学分析结果相符。
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