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目的:癫痫是神经系统的一种常见病,它是一组以反复发作性大脑神经元异常猝发放电所致的暂时性大脑功能失常为特征的慢性疾病。已有研究证实大鼠每次惊厥发作均可导致脑内神经细胞凋亡的发生,转录因子NF-kB参与或促进了脑神经细胞凋亡。我们先期研究表明在癫痫持续状态发作后大鼠海马结构中存在明显的苔藓纤维发芽。因此,本研究的目的希望能够明确单次癫痫发作后是否也存在苔藓纤维发芽现象,如果有,这种苔藓纤维发芽与NF-kB表达和神经性钙黏附分子(N-Cadherin)是否存在相关性。
方法:利用腹腔注射戊四氮制作发育期SD大鼠(14d、28d两个日龄组)的单次惊厥发作模型,惊厥发作达Racine标准中V级发作。再将各日龄组随机分为NS组、致惊组和PDTC预处理组,分别采用免疫组化法于致惊后24h及致惊后3周观察NF-kB与N-Cadherin的表达,HE染色观察海马CA1区神经细胞形态学变化,并利用特异性的Timm染色法于致惊后1周和3周观察海马苔藓纤维发芽。
结果:
1.HE染色:NS组海马切片显示,神经细胞排列整齐紧密,边缘清晰,胞浆透明,细胞核呈圆形或椭圆形,染色质分布均匀,核仁清晰,形态正常;而致惊组可见海马CA1区锥体细胞出现核固缩浓染、染色质凝集成块、边集、细胞变小、边缘欠清晰等特征性凋亡改变。PDTC预处理组显示完整的细胞明显增多。
2.免疫组化NF-k B染色:NS组大鼠海马没有发现NF-kB p65核转位细胞,而致惊后24h各日龄组幼鼠脑组织中海马结构中NF-kB p65核转位细胞较NS组明显增加(P<0.01),阳性细胞主要表现为胞浆和胞核均出现棕黄色颗粒;PDTC预处理后NF-kB p65的核转位细胞较致惊组明显减少(P<0.05),胞浆染色变淡。
3.Timm染色:NS组在海马CA3区可见极少Timm染色颗粒,致惊后1周偶见Timm染色颗粒,与NS组相比无明显统计学意义(P>0.05);致惊后3周可见较多Timm染色颗粒沿海马CA3区呈条带样分布,半定量评分在2分左右,较NS组明显增加(P<0.01);PDTC预处理组可见Timm染色颗粒较相应对照组明显减少(P<0.05);
4.免疫组化N-Cadherin染色:NS组大鼠海马可见少量的N-Cadherin的阳性细胞,着色不深;致惊组可见CA3和齿状回门区有较多的阳性细胞,主要表现为胞浆和核膜棕黄色,均匀弥漫染色,与NS组相比明显增多(P<0.01);PDTC预处理组可见N-Cadherin染色阳性细胞较相应对照组明显减少(P<0.05)。
结论:
1.单次惊厥发作在发育鼠可以引起海马不同程度的苔藓纤维发芽。
2.发育鼠单次惊厥后NF-k B在海马结构中表达增高。
3.N-Cadherin的分布位置与变化时相与苔藓纤维发芽相吻合。
4.NF-k B和N-Cadheri可能参与或促进了苔藓纤维的发芽。