论文部分内容阅读
目的观察温度敏感性离子通道TRPM8在人类软骨组织中的表达，探讨其在软骨组织中表达的意义。方法收集不同年龄的正常人的正常膝关节软骨组织标本15例，膝关节骨性关节炎患者的关节软骨组织标本5例，每例标本均在胫骨平台内侧取样，装于灭菌处理的EP管中，放于—80℃的冰箱中保存。每例标本均采用番红“O”染色验证是否发生退行性改变。本实验分为两部分。第一部分选取OA软骨组织标本5例作为骨关节炎组，选取50-60岁组5例作为正常对照组，利用免疫荧光技术和Western blot方法观察TRPM8通道在正常人软骨以及OA软组织中的表达，然后用Western blot检测TRPM8在两组间的表达差异性。第二部分将正常人体软骨组织样本均进行Western blo分析，所得条带均进行灰度值分析，将灰度值没有统计学差异的归为一组,共三组，每组5例，分别为：20-40岁组，40-50岁组，50-60岁组，然后用Western blot检测TRPM8在正常的人软骨组织标本的年龄趋势。结果显微镜下骨关节炎组的番红“O”染色显示关节软骨组织不正常，染色不均匀，层次不清，细胞间区染色明显变浅，糖胺多糖减少。正常对照组染色正常，软骨组织呈均匀红色，浅表层染色淡，纵向区染色增强，深层染色最深；免疫荧光与Western blot方法均检测到TRPM8通道蛋白，免疫荧光染色可见TRPM8蛋白均匀的分布在细胞膜上；利用考马斯亮蓝染色控制上样量，依据QuantityOne4.62版软件得出各例TRPM8条带灰度值进行统计学分析，结果显示骨关节炎组的TRPM8的表达量高于正常对照组，t检验证明有统计学意义（P＜0.05）。同样用上述方法检测不同年龄段正常软骨组织标本的TRPM8的表达量，结果显示随着年龄的增长，TRPM8的表达呈下降趋势，方差分析证明有统计学意义（p＜0.05）。结论TRPM8在人类软骨组织上有表达，并且骨关节炎组的TRPM8的表达量高于正常对照组；在正常关节软骨组织中随着年龄的增长，TRPM8的表达呈下降趋势，但仍不能说明TRPM8在软骨组织病理生理机制中所扮演的角色。我们下一步的研究将关注TRPM8在软骨细胞生理和病理过程中所发挥的作用，以便为关节软骨损伤的预防保护与治疗提供新的靶点。