背景 胆囊癌发病过程隐匿，且侵袭力强，预后较差。山于胆囊癌缺乏早期诊断的手段及其高侵袭性，胆囊癌在临床上治疗效果较差。近年来，基因研究取得了巨大进展，已发现了许多与胆囊癌密切相关的基因。随着分子生物学技术的发展，胆囊癌相关基因(如PCNA，Ki67，P16，P53，nm23等)的发现，使寻求新的胆囊癌早期诊断和治疗的方法来提高其手术切除率和生存率成为可能。 Midkine是一种新的肝素结合生长／分化因子。首先作为一个维甲酸诱导基因的产物被鉴别出来。目前已被证实的Mikdine 4种生物学功能：1．促进胚胎脑神经元的轴突向外生长。2．增加主动脉内皮细胞的血浆酶原活性。3．裸鼠体内使NIH3T3细胞癌性转化。4．促进血管生长和有丝分裂作用。除此之外，国外最新研究还表明：Mikdine对胚胎神经原和Wilm’s瘤细胞具有抗凋亡作用；能促进胚胎神经原细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞等各种细胞的移动；Mikdine的这两种作用可能有助于肿瘤细胞的浸润与生存。在神经母细胞瘤、神经胶质细胞瘤和膀胱癌中，高水平的Mikdine表达与临床预后有关。高分化的胃癌细胞Midkine表达明显低于低分化的胃癌细胞及印戒细胞癌。在正常成人组织中，Midkine的表达高度受限，在肾、肺、胃、结肠、卵巢和甲状腺中可检测出低水平表达的Midkine。但是在一些人的恶性肿瘤中如乳腺癌、肺癌、食管癌、胃癌、结肠癌、肝癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、神经母细胞瘤和Wilm’s瘤中观察到高水平表达的Midkine。 目前有关Mikdine在胆囊癌组织中的表达情况知之甚少，也不清楚Mikdine在胆囊癌变以及肿瘤发展过程中所扮演的角色。本实验拟通过检测Midkine蛋白在胆囊癌组织中的表达，以了解其作为胆囊肿瘤标记物的可能性，了解并研究其表达与胆囊肿瘤临床病理特征之间的关系。同时，第二军医大学2001级硕L学位论文通过比较M记kine蛋白与胆囊癌常用的增殖指标Ki67蛋白、预后指标Iun23蛋白以及CD34表达情况，以进一步了解Midkine蛋白在胆囊癌发生发展中扮演的角色。 目的1、检测Midkine蛋白在胆囊癌组织及胆囊其他良性病变中的表达，探讨 M记kine蛋白的表达与胆囊癌复发、转移、年龄、性别等一般临床因 素及肿瘤直径、浸润、病理分级、分期等临床病理特征的关系。2、初步探讨Midkine与胆囊癌血管生成、胆囊癌细胞增殖指标Ki67以及 胆囊癌转移指标nln23的关系。方法l、对53例胆囊癌、12例胆囊癌转移的淋巴结，12例腹腔转移灶、14例 胆囊腺瘤、20例胆囊炎性息肉、20例胆囊炎组织和18例正常胆囊病 例进行回顾，重新复习切片，明确病理诊断、病理分级。2、以M记kine多克隆抗体免疫组化染色检测胆囊癌胆囊癌转移的淋巴 结，腹腔转移灶、胆囊腺瘤、胆囊炎性息肉、胆囊炎组织和正常胆囊 中Midkine的表达。3、以CD34单克隆抗体、Ki一67单克隆抗体、Iun23单克隆抗体免疫组化 染色检测上述组织微血管密度(mierovessel density， Mvn)、Ki一67、 nrn23表达，并与Midkine表达比较。4、标记指数(LI)计算标准:每一切片在低倍镜下选择组织结构良好、背 景清晰的5个阳性细胞最密集的的区域，每个区域在高倍镜视野下(X 200)计算100个细胞中的阳性细胞数(不包括间质细胞和其他非肿瘤 细胞)，取5个区域阳性细胞数的平均值作为标记指数。5、微血管判断标准:CD34染色血管内皮细胞的胞质中出现清晰棕黄色单 个血管内皮细胞或血管细胞簇为一个血管标记，管径大于8个红细胞 直径者不列入统计之内，先在低倍镜下找到血管密度最高区域，随后在高 倍镜(x 200)下选择5个视野进行微血管数目计数，取平均值为MVD。6、数据统i十分析方法statistieal analysis methods:Wileoxon:a砍Sum test andt第二军医大学2001级硕上学位论文 check.计数及计量资料分别采用各组标记指数采用Wilcoxon秩和检验 法，检验水准取0.05，双尾检验。胆囊癌Midkine的标记指数与Ki67 的标一记指数、nm23标记指数及MVD相关系数采用t检验，检验水准取 0.05，可信区间取95%。所有数据采用SPSSg.O统计分析软件分析。结果1、在胆囊癌组织中，M记kine表达广泛，染色强度明显增强，染色在癌 组织内呈 弥漫分布，全部癌组织中标记指数72(41一98)。其中腺癌标记指数 70(引一91)。鳞癌标记指数73(50一94)。粘液癌中可见印戒样癌细 胞标记指数82(71一98)。2、正常胆囊、胆囊炎组织、胆囊炎性息肉及胆囊腺瘤M记kine表达的中位 指数Ll分别为0、5(0一12)、7(0一16)与17(5一29)，与胆囊癌的MK表达的 中位指数Ll为72(41一98)比较，均有显著差异(P<0.01)。3、胆囊癌中M记kine表达与肿瘤细胞分化程度、临床分期、有无淋巴结 转移、肝脏浸润及腹腔转移有关(P<0.05)。4、胆囊癌组织中，新生血管、毛细血管、小静脉及小动脉内皮细胞均见 CD34表达;Ki67表达位于细胞核，胞浆未见染色，染色在癌组织内呈 弥漫分布，全部癌组织中标记指数52(35一78);，nln23表达于胞浆，细 胞核未见染色。高分化胆囊癌组织中n