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背景成人T细胞白血病(Adult T-cell leukemia/lymphoma,ATL)是由人类T细胞白血病病毒I型(Human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)引起的外周T淋巴细胞恶性肿瘤,与其他侵袭性的非霍奇金淋巴瘤相比,预后较差。虽然有骨髓移植、免疫治疗等治疗手段,但治疗成本高。传统的化疗也有局限性,引起严重的并发症。因此寻找有针对性、低毒高效的治疗药物已成为目前研究的重要方向。目的本研究旨在筛选可抑制ATL细胞的活性成分,探究其抑制ATL细胞体外增殖的影响及可能的分子机制,为临床上ATL的预防和治疗研究提供理论和实验基础,对于开发新的药物靶点有广阔的前景。方法首先采用CCK-8法从不同的中药和萘酰亚胺类衍生物中筛选出可抑制ATL细胞增殖的活性成分;Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化。其次通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布的变化;透射电子显微镜观察细胞的超微结构;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3等相关蛋白表达的变化;采用Pan-caspase抑制剂与药物共同作用,检测细胞凋亡变化。最后通过RT-PCR、细胞转染、siRNA筛选等实验检测药物对HTLV-1相关基因表达的影响。结果1.通过CCK-8法筛选出抑制ATL细胞增殖的活性成分为穿心莲内酯和萘酰亚胺衍生物2f和4pq。Hochest 33258染色后可观察对照组细胞核为淡蓝色,给药组细胞逐渐变为亮蓝色,说明药物在一定浓度下能够诱导细胞凋亡;2.流式细胞术检测显示穿心莲内酯能够诱导ATL-ED、TL-om1、ATL-2细胞凋亡,并且其对ATL-ED细胞出现不同程度的G2/M期阻滞,出现亚二倍体峰。2f和4pq能够诱导ATL-2细胞凋亡,但是对ATL-ED、TL-om1出现G2/M期阻滞。3.透射电子显微镜观察对照组细胞呈椭圆形,细胞器完整,核仁明显,染色质均一。穿心莲内酯作用后染色质固缩,胞浆内出现许多空泡,线粒体肿胀。2f和4pq作用后,核染色质边集化,线粒体变黑。4.Western blot结果显示穿心莲内酯能够引起Caspase-3、Caspase-9,PARP发生剪切,上调Bax、Bad、Cyt-c的表达,下调Bcl-2和CyclinB的表达。采用Pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理ATL-ED细胞后与穿心莲内酯共孵育,细胞凋亡率下降。2f和4pq能使拓扑异构酶Ⅱ的表达降低。5.RT-PCR结果显示穿心莲内酯、4pq能够明显抑制ATL-ED细胞中HBZ基因的表达。将病毒编码的蛋白Tax转入不含Tax表达的细胞中,再用穿心莲内酯作用后,细胞出现一定程度的增殖,敲低Tax表达后,给药后细胞活力下降。结论综上所述,本文从中药单体和萘酰亚胺类衍生物中筛选出能够抑制ATL细胞增殖的活性成分分别为穿心莲内酯、2f和4pq。穿心莲内酯主要通过Caspase依赖的途径诱导ATL细胞凋亡,其诱导细胞凋亡以线粒体途径为主,并且能够诱导DNA损伤。同时穿心莲内酯通过下调病毒编码的HBZ基因表达,影响病毒的复制,从而抑制ATL的增殖。2f和4pq为拓扑异构酶抑制剂,能够抑制拓扑异构酶Ⅱ的表达,从而使受药细胞基因组DNA发生双链断裂导致细胞周期阻滞,从而影响ATL细胞有丝分裂进程。