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研究背景:乙型肝炎病毒(HBV)感染呈现全球性,它是导致急/慢性乙型病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞肝癌(HCC)的主要原因之一。慢性乙型病毒性肝炎(CHB)由于感染人数众多,已经成为了全球卫生健康安全问题之一。所以研究CHB的发病机制以及HBV感染与机体免疫之间的关系对于治疗CHB有重要意义。补体B因子(CFB)是补体系统中旁路途径的一个重要分子,补体系统在人体抵抗病原微生物的过程中起到了重要的作用。目前关于HBV感染与免疫之间关系的研究主要集中于适应性免疫,而对于固有免疫尤其是补体系统与HBV感染之间的相互关系尚不清楚。因此研究CFB在HBV感染中的作用,对于进一步完善HBV感染与机体免疫系统之间的相互关系有重要意义。前期我们通过全基因组关联研究,发现CFB基因上的一个位于编码区的单核苷酸多态性位点(SNP)rs12614(R32W,CFB基因第32位密码子由精氨酸转变为色氨酸)与CHB发病风险相关,但是CFB R32W在HBV感染中的具体作用机制尚不清楚。研究的目的:本研究拟探讨CFB基因及其功能多态位点R32W在HBV感染中的作用机制,从而进一步解释CFB R32W与CHB之间的关系。研究方法和内容:(1)在HepG2以及Huh7细胞中,转染HBV1.3质粒,用逆转录-定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA),分析HBV对CFB基因是否有抑制作用。(2)在HepG2以及Huh7细胞中,转染不同组分的HBV质粒(HBp、HBc、HBx和HBs),用RT-qPCR和ELISA,分析HBV不同组分蛋白对CFB基因是否有抑制作用。(3)在HepG2.2.15细胞中,通过质粒转染或慢病毒感染,过表达或者敲低CFB基因的表达,用电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测细胞上清中的HBeAg和HBsAg,qPCR的方法检测细胞上清中HBV DNA的水平。验证CFB是否能抑制HBV复制。(4)在HepG2和293T细胞中,转染CFB32R和CFB32W的质粒,用RT-qPCR以及ELISA,分析不同细胞中CFB32R和CFB32W表达量是否有差异。(5)在HepG2.2.15细胞中,转染CFB32R和CFB32W的质粒,用RT-qPCR以及ELISA,分析在HBV感染状态下CFB32R和CFB32W的表达量是否有差异;用ECLIA和qPCR来检测HBeAg、HBsAg以及HBV DNA水平,分析CFB32R和CFB32W抑制HBV复制是否存在差异性。研究结果:(1)HBV通过抑制内源性CFB基因的转录,进而降低CFB蛋白水平。(2)HBs蛋白显著抑制细胞内源性CFB基因的表达。(3)CFB抑制HBV复制,主要体现在减少HBeAg和HBsAg的分泌水平及抑制HBV DNA的复制。(4)CFB32W的表达量高于CFB32R。(5)CFB32W抑制HBV复制能力弱于CFB32R,主要体现于CFB32W抑制HBV DNA复制的能力弱于CFB32R。结论:HBV有抑制CFB表达的作用,同时CFB可以抑制HBV复制。CFB32W的表达量高于CFB32R,但是CFB32W抑制HBV复制的能力弱于CFB32R。