背景与目的:现如今,“酒”已经成为人们日常生活中必不可少的一种“饮料”,甚至发展成为一种文化。酒其主要成分是乙醇,而乙醇是一种在体内可自由扩散且氧化、代谢缓慢的物质,对人体许多系统脏器均有损伤作用,且能轻易地通过血脑屏障,导致大脑中枢神经系统的损伤。在我国,由于人们生活水平的不断提高,并受我国传统饮酒文化的影响,以及“酒”在社会人际交流中的作用,乙醇滥用、乙醇中毒现象呈增长趋势,并呈现年轻化趋势。而在中枢神经系统中,海马神经元对乙醇损伤的敏感性比较高,可引起海马神经元结构和功能的改变,造成学习记忆认知功能的损害。本研究主要是通过体外培养原代大鼠海马神经元,观察在不同浓度乙醇的作用下,其形态学和细胞活性发生的变化,为进一步探究乙醇对神经元损伤的作用机制提供一定的依据。方法:从实验室饲养的24h出生的SD大鼠乳鼠,分离出海马神经元,在体外无血清培养至第7天,经NSE免疫细胞化学染色鉴定海马神经元的纯度。将培养好的海马神经元随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和对照组,在培养液中加入无水乙醇,使培养液中乙醇的终浓度分别为11mM,33mM,66mM,对照组在培养液中加入等量生理盐水,在二氧化碳培养箱共同培养1h、12h、24h。然后通过免疫细胞化学染色观察不同浓度不同作用时间干预下海马神经元的形态学变化,用CCK-8试剂盒检测海马神经元活性的变化。结果:1.不同浓度不同作用时间乙醇干预下海马神经元的形态学变化:低剂量组加入11mM乙醇,各时间段细胞形态未发生明显改变,胞浆和突起着色的深浅未发生明显变化,神经元的特征与正常对照组基本相同。中剂量组加入33mM乙醇,作用1h后极个别细胞的边缘变得模糊不清,细胞未出现明显的聚集现象,细胞突起数量减少不明显。作用12h后细胞开始出现聚集现象,呈簇状,可见神经胶质细胞开始增殖。作用24h后可见细胞密度明显降低,细胞之间的突触连接减少,每个细胞的突起数量减少,但仍可见稀疏的神经网络。高剂量组加入66mM乙醇,作用1h后细胞的突起长度变短,突起数量变少。作用12h后细胞簇状聚集现象明显,神经胶质细胞增殖大量增殖。作用24h后细胞大量死亡,细胞密度极低,细胞的突起变短,细胞间的突触连接极少,几乎不能形成神经网络。2.不同浓度不同作用时间乙醇干预下海马神经元的活性变化:不同浓度乙醇对海马神经元细胞活性的影响与对照组相比有明显的变化,细胞活性在不同作用时间均有下降,活性改变的程度与乙醇作用浓度呈剂量依赖关系,尤其是高浓度组对海马神经元活性的改变更为明显。相同浓度乙醇在不同的作用时间对海马神经元的活性的影响与对照组相比差异有统计学意义。结论:1.采用阴道涂片法和循环交配法相结合的方法,成功获取精确妊娠孕鼠和P0期乳鼠,简化动物繁殖过程,保证实验中乳鼠的供给。2.中、高剂量的乙醇会造成原代培养大鼠海马神经元的胞体损伤,细胞间的突触连接减少,突起长度变短,突起数量减少,且与作用时间相关联。3.不同浓度的乙醇能够引起原代培养大鼠海马神经元活性的降低,与乙醇浓度呈剂量依赖性关系,且与作用时间有关。