[背景]脾脏是机体最大的外周免疫器官,脾脏在机体免疫、抗感染、血液滤过等方面起着重要的作用,从脾切除术后凶险性感染的发现开始,脾脏越来越得到人们的重视,脾脏对机体其他方面的重要作用也渐渐被发现。研究显示脾脏在机体脂质代谢中起着重要作用,脾脏可以降低血脂水平,脾切除术后血脂水平升高。酒精性脂肪性肝病(NAFLD)以肝细胞脂质蓄积为主要特征,包括简单肝细胞脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)以及其发展到严重阶段的肝硬化甚至肝癌发生等一系列肝脏疾病表现。流行病学显示NAFLD在全球,尤其是发达国家的患病率越来越高,已成为严重危害人类健康的杀手。脾脏跟肝脏解剖学上相邻,脾脏在许多肝脏疾病的发生发展中扮演着重要的角色,脾脏分泌的生物活性物质可通过门静脉血流进入肝脏,影响肝脏疾病的进展与预后,比如脾源性的TGF-beta在脾脏促进肝纤维化发展过程中起着重要作用。研究显示,非酒精性脂肪性肝病的大鼠模型中行脾脏切除的大鼠肝脏脂肪变、肝组织甘油三酯及一些不饱和脂肪酸含量明显高于假手术组。这说明,在NAFLD的发生发展过程中,脾脏起到了减缓进展的作用,切除脾脏后NAFLD进展加快。但其作用机制还不清楚。PTEN基因即第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因,PTEN起始作为一个有酶活性的抑癌基因被认识,但近年来,由于其编码的PTEN蛋白具有强大的磷酸酶活性,关于PTEN的研究及论述早已不再局限于一个新发现的抑癌基因。PTEN蛋白通过其脂质磷酸酶活性去磷酸化二磷酸肌醇和三磷酸肌醇从而负性调节PI3K/Akt信号通路,而PI3K/Akt信号通路是包括胰岛素和其他一些生长因子发挥功能及机体糖、磷脂等代谢一条关键信号转导通路。PTEN基因的表达水平与NAFLD密切相关,首先,在NAFLD病人及动物模型中,肝细胞PTEN水平明显下降：其次,在体外培养的肝细胞中人为降低其PTEN基因表达水平会导致肝细胞脂质的明显蓄积；再者,敲除PTEN基因的小鼠可自发形成严重的NASH。综上,脾脏与NAFLD关系密切,但其具体机制还不清楚,脾脏可能通过影响肝PTEN基因的表达与功能而影响NAFLD进展。[目的]研究大鼠非酒精性脂肪性肝病进展过程中脾脏对肝PTEN基因的表达和功能的影响,探讨脾脏影响NAFLD发展可能的机制。[方法]1、动物及分组清洁级SD大鼠40只,体重160。180g,大鼠分笼喂养,5只/笼,饲养环境25℃。适应性喂养1周后,随机分为4组：A.正常饲料+假手术组B.日常饲料+脾切除术组C.高脂饲料+假手术组D.高脂饲料+脾切除术组。高脂饲料成分：1%胆固醇+20%猪油+79%基础饲料。2、手术术前大鼠禁食12h,禁水8h。腹腔注射戊巴比妥钠麻醉(50mg/kg)后,取腹正中线稍左2cm竖切口,分两层进入腹腔,分离并结扎脾脏血管,完整取下脾脏,检查无出血后分两层关腹。假手术组只做相同开关腹处理。所有手术器械均经高压灭菌,手术步骤严格按照无菌操作要求进行。建模后8周取大鼠肝组织及下腔静脉血。3、实验技术方法采用全自动化学分析仪(Dade Behring RXL)测定血清血脂浓度；固定的肝组织石蜡包埋后,4um连续切片,HE常规染色,光学显微镜观察脂肪肝程度；氯仿甲醇匀浆法提取肝组织甘油三酯,按照甘油三酯浓度测定试剂盒说明书,测定甘油三酯浓度；Western blotting检测肝PTEN蛋白及pAkt、Akt水平；实时荧光定量PCR检测PTEN mRNA水平。4、统计学分析计量资料均以均数±标准差表示,t检验比较两组数据间的差异,应用SPSS15.0软件处理,P<0.05为差异具有统计学意义。[结果]1. A、B、C、D组大鼠体重(g)分别为：371.7±15.3、369.4+17.8、398.6±15.3、406.0±19.2；肝湿重(g)分别为：12.2±3.2、11.8±2.7、14.8±3.3、15.4±3.6；肝指数(%)分别为：3.16±0.32、3.23±0.26、3.57±0.54、3.61±0.43;血清LDL浓度(mg/dL):21.7±16.40、30.01±5.21、33.09±3.76、52.27±6.24；血清TG浓度(mg/dL):67.03-6.71、70.84±7.23、90.99±7.94、97.63±9.74；血清HDL浓度(mg/dL):21.04±5.39、23.62±4.11、20.66±3.54、24.54±3.05；血清TC浓度(mg/dL):52.2±67.03、63.51±9.35、70.72±11.95、92.71±3.93；血清VLDL浓度(mg/dL):12.45±3.13、16.81±3.35、25.99±8.19；30.27±4.67；肝组织甘油三酯浓度(mg/dL):67.29±10.01、67.21±10.71、96.82±15.58、119.47±12.06。实验结果表明,喂养高脂饲料的大鼠组与喂养正常饲料的大鼠组(同手术方式相比)比较：高脂饲料组大鼠体重、肝湿重、肝指数、血脂浓度及肝组织甘油三酯含量较正常饲料组明显升高(LDH除外),高脂饲料组大鼠肝细胞脂肪变明显,正常饲料组肝组织正常。2.脾切除组与假手术组大鼠(同饲料组间)比较：A与B组比较,TC、LDL、 VLDL,有显著差异(B>A)；C与D组比较,TC、LDL有显著差异(D>C)；D组较C组肝组织甘油三酯水平明显升高,差异具有统计学意义,而A组与B组间无差异。3.A、B、C、D组PTEN基因蛋白表达水平分别为：1.249±0.606、1.226±0.625、1.041±0.054、0.695±0.055：PTEN基因mRNA水平分别为：1.352±0.690、1.289±0.166、1.192±0.061、0.746+0.087；C组与A组及B组与D组比较,PTEN蛋白及mRNA水平均明显低于后者,差异具有统计学意义；进一步检测C、D组pAkt蛋白水平分别为：0.980±0.069、1.463±0.108；Akt蛋白水平分别为：0.920±0.065、1.121±0.031：pAkt/Akt分别为：1.224±0.098、1.500±1.159；实验结果表明：高脂饲料组大鼠中脾切除术组与假手术组比较,PTEN基因蛋白水平及mRNA水平均明显低于假手术组,而pAkt及pAkt/Akt水平则明显高于假手术组。[结论]1.以猪油+胆固醇为基础高脂饲料喂养可以导致大鼠血脂水平及肝组织甘油三酯含量明显升高、肝细胞明显脂肪变性,从而建立NAFLD模型。2.脾脏在大鼠机体脂质代谢中起着重要作用,切除脾脏会导致机体脂质代谢紊乱,引起高脂血症。3.非酒精性脂肪性肝病大鼠的肝组织PTEN蛋白及mRNA表达水平较对照组大鼠明显下降,非酒精性脂肪性肝病的大鼠肝组织PTEN表达水平明显下降,PTEN可能在非酒精性脂肪性肝病的发生发展中起到了重要作用。4.脾脏在大鼠肝脂质代谢及NAFLD发生发展中起着重要作用,切除脾脏后大鼠NAFLD进程加快。其作用机制可能与脾切除术后肝PTEN基因表达下降,从而活性Akt水平升高导致大鼠肝脏脂质代谢紊乱有关。