牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）和牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）是常见的牛传染病病原,在全世界均有流行,我国的感染情况也不容乐观。这两种病毒在临床上以混合感染较为多见,可导致感染牛的生产性能与繁殖性能大大降低,给全球养牛业造成巨大的经济损失,为疾病的防控带来极大的困扰。因此本研究围绕这两种病原展开了一系列研究,主要研究内容包括:1.BVDV与IBRV二重二温式PCR检测方法的建立根据BVDV的5’-UTR和IBRV的gB基因序列分别筛选了一对特异性引物,建立了一种可同时检测BVDV和IBRV的二重二温式PCR方法。结果显示,该PCR方法对其他牛源病毒无特异性扩增,对BVDV、IBRV的最低检测限分别为1.32ng/μL、0.047ng/μL。对采集自宁夏地区113份粪便样本的检测结果显示,BVDV、IBRV阳性检出率分别为12.39%和22.12%,两种病原混合感染的阳性检出率为7.08%。与单一二温式PCR检测结果相比较,BVDV与IBRV的阳性符合率均在90%以上,两种病原混合感染的阳性符合率可达100%。结果表明,本试验建立的二重二温式PCR检测方法可用于BVDV和IBRV混合感染的检测及流行病学调查。2.宁夏地区BVDV毒株的分离鉴定为了解宁夏地区牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的分子流行病学及其Npro基因的遗传变异情况,通过RT-PCR的方法对宁夏某牛场疑似BVDV感染牛的9份血清进行鉴定。将鉴定为BVDV阳性的样品处理后接种到牛肾传代细胞（MDBK）进行病毒的分离。采取病毒滴度测定、间接免疫荧光试验（IFA）、电镜观察、病毒Npro基因扩增及序列测定、序列分析等方法,对分离得到的病毒进行鉴定及遗传进化分析。结果显示:该分离株接种MDBK细胞培养可产生明显的致细胞病变效应,说明该毒株为致细胞病变型（CP）。分离株培养48h病毒滴度达107.0TCID50/0.1mL,电镜下可观察到直径50～60 nm的圆形病毒粒子,间接免疫荧光试验（IFA）结果为阳性。该毒株Npro基因PCR扩增结果为阳性,且目的片段与预期大小相符。遗传进化分析结果显示,该分离株与BVDV-2a亚型的GS2018株（登录号MN527354.1）亲缘关系最近,且二者Npro基因序列一致性为98.9%。结果表明本研究成功分离到一株CP型BVDV-2a亚型毒株,将其命名为BVDV NX-01株。