论文部分内容阅读
研究背景:据WHO 2016年全球结核病报告显示,2015年全球结核病患者人数高达1040万,因结核病死亡的人数达到180万。我国是全球结核病高发的国家的之一,仅次于印度和印度尼西亚。并且,2015年全球多重耐药和广泛耐药性结核病患者有48万,我国耐药性结核病患者人数约为7万,仅次于印度(约13万)。耐药性结核分枝杆菌的出现使结核病的控制变得越发困难,因此,亟需鉴定新的药物靶标并研发新的抗结核药物。SOSA法是一种可以有效从旧药或前体药物中筛选出抗疟疾、抗菌和抗病毒等药物的方法。由于这些旧药物的安全性和药代动力学特性已经在人或动物中得到了评估,其潜在的作用可以在临床中直接检测或作为新药用于进一步发展,这一策略已被应用于研发新的抗疟疾、抗菌和抗病毒药物。目的:本文旨在通过 SOSA 法(selective optimization of side activities,选择性优化副作用)筛选出能抑制结核分枝杆菌以及结核分枝杆菌耐药株生长的药物,为结核病及耐药性结核病的治疗提供帮助。方法:首先利用Echo微波加样系统将1280种药物加500 nL到96孔细胞培养板中,然后与耻垢分枝杆菌进行共培养48 h。用酶标仪检测共培养后细菌的A600值以筛选出抑制耻垢分枝杆菌生长的药物,然后将筛选出来的药物进行BCG和H37Ra生长抑制实验,以筛选出能抑制BCG和H37Ra生长的药物,并计算药物对细菌的IC50值。接着将筛选出的药物进行H37Rv生长抑制实验,鉴定筛选出的药物是否能够抑制H37Rv生长,并计算药物对细菌的IC50值。将最后筛选出来的药物进行临床结核分枝杆菌生长抑制实验,以确定药物是否能够抑制临床结核分枝杆菌的生长,并计算药物对细菌细菌的IC50值。最后利用CCK-8法检测药物的细胞毒性(LD50),并根据选择系数(SI=LD50/IC50)来评估药物的安全性。结果:1280种药物库中有67种药物在浓度为25μM时能够完全抑制耻垢分枝杆菌的生长。根据药物的药理作用,我们选择了9种药物进行后续研究。X药能够剂量依赖性的抑制H37Rv、H37Ra和BCG的生长,其IC50分别为0.65μg/ml、0.3μg/ml和0.75μg/ml,且X药对临床结核分枝杆菌生长的抑制也呈剂量依赖性:五种药物敏感性菌株的IC50分别为(μg/ml):0.60,0.71,0.47,0.43,0.46;五种多重耐药菌株的IC50分别为(μg/ml):0.45,0.39,0.51,0.39,0.71;五种耐异烟肼菌株的IC50分别为(μg/ml):0.49,0.50,0.80,0.46,0.51;两种耐利福平药物菌株的IC50分别为(μg/ml):1.0,0.74;两种非结核分枝杆菌菌株的IC50分别为(μg/ml):4.63,4.26。该药物对鼠巨噬细胞Raw264.7和腹腔巨噬细胞的细胞毒性LD50分别为(μg/ml):2.4和1。结论:X药能够剂量依赖性的抑制BCG、结核杆菌H37Ra/H37Rv、药物敏感性和耐药性结核分枝杆菌的生长,对于敏感和耐药性结核分枝杆菌导致的肺结核和肺外结核病治疗具有潜在应用前景。