利用生物传感器技术检测疾病标志物,进行临床疾病的快速诊断以及流行性疾病的现场筛选与群体监控,是当前医学上既新颖又极具吸引力的热门研究课题之一。人胸苷激酶Ⅰ( hTK1 )是一种新的肿瘤标志物,我们就hTK1开展了新型免疫分析方法的研究。这些方法具有快速、准确、方便等优点,而且还避免了放射性免疫方法中经常遇见的问题,有一定的实用价值,有望用于hTK1的临床免疫检测。(1)研制了一种用于hTK1检测的荧光增强型免疫分析方法。采用磁纳米颗粒作为生物分子固定化载体,将辣根过氧化物酶标记的抗体(HRP-Ab)和游离的待测hTK1同时与磁性纳米颗粒表面的固定化hTK1竞争反应。当与磁场分离后,结合在磁性纳米颗粒的酶标记抗体催化3-(间-羟苯基)-丙酸形成荧光产物,在470 nm处产生荧光增强,且荧光增强反比于待测hTK1的浓度。hTK1的线性检测范围为0.01-1 ng/mL,检测下限达到0.008 ng/mL。该荧光免疫方法能很好地检测癌症血清和正常血清中的hTK1,且简单、快速、灵敏,该方法尚可用于其它生物分子的临床检测。(2)研究了一种新型hTK1电流型免疫分析方法。制备了纳米金-壳聚糖复合材料(Nano Au-Chit),壳聚糖膜表面丰富的-NH2与纳米金强静电结合,在玻碳电极表面获得稳定的纳米金-壳聚糖复合物修饰层,再共价固定hTK1。负电性的纳米金可以有效地保持酶的活性,从而制备了性能良好的电流型hTK1免疫传感器,hTK1检测的线性范围是0.5-10 ng/mL,检测限为0.22 ng/mL,显示了良好的检测灵敏度。(3)建立了一种hTK1显微检测新方法。通过扫描电化学显微镜(SECM)的收集模式,检测辣根过氧化物酶(HRP)催化对苯二酚( H2Q )氧化产生的1,4一苯醌(BQ)来间接检测样品中的hTK1。实验中,我们确定了检测hTK1的实验条件,缓冲液为0.1m ol/L磷酸缓冲溶液( pH7 .0 ),底物H2Q和H2O2的浓度均为1.0 x 10-3 mol/L,探头电位为- 0.3 V。在这些实验条件下,对固定在金基底上的hTK1点进行了扫描,得到了它的SECM图像。