下丘脑视前区“针刺灌流液”对去卵巢大鼠整体和离体效应的研究

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目的:本文在去卵巢大鼠模型上,针刺处理一组特定穴位后,用推挽灌流技术收集下丘脑视前区(POA)的推挽灌流液(简称“针刺灌流液”),并将其微量注射于另一个未经针刺处理的去卵巢大鼠的下丘脑POA,或条件孵育的下丘脑脑片,观察其是否可产生模拟的(针刺)效应,以探讨“针刺灌流液"是否可作为一种针刺信息的载体,将整体的特定针刺效应转移到离体培养的组织或细胞上,为研究针刺治疗围角经期综合征信号传(转)导机制,提供一种可行的实验新方法。 材料和方法:采用切除双侧卵巢导致下丘脑.垂体.卵巢轴(HPOA)功能异常的大鼠模型。将SD大鼠随机分成收集灌流液组和注射灌流液组两大组。收集灌流液组又分为收集“针刺灌流液”组(OVXAP)和去卵巢大鼠POA灌流液组(OVXP);OVXAP连续三天给予电针“关元”为主的一组穴位处理,以阴道脱落细胞重新出现作为电针有效的标志;RIA测定针刺后动物血E2水平,HPLC测定灌流液中的单胺类和氨基酸递质以及D一内啡肽的含量,对“针刺灌流液”进行质量控制;OVXP的灌流液收集方法同OVXAP,但不给予针刺处理。注射灌流液组再分为注射“针刺灌流液”组(IOVXAP)、注射灌流液对照组(IOVXP)和注射人工脑脊液对照组(IaCSF)。注射前后分别作阴道涂片,进行脱落细胞学检查,以确定是否出现针刺样效应;在加入不同剂量的“针刺灌流液”条件下,作下丘脑脑片的条件孵育,以观察“针刺灌流液”对脑片分泌GnRH的影响,进一步确定“针刺灌流液”在离体组织上是否能模拟特定针刺的作用。 结果:以“针刺灌流液”中B.内啡肽、DA、GABA、5-HT和Glu这五个主要影响GnRH释放的神经递质的检测均值作为初步质量控制的指标,用达到质控标准的“针刺灌流液”下丘脑POA核团微量注射去卵巢大鼠,以去卵巢大鼠血E2显著升高作为“针刺灌流液”有效的标志。“针刺灌流液”中β-内啡肽、DA、GABA、5-HT以及Glu的均值分别为:17.69±1.96pmol/L,20.9±3.43nmol/L,218.83±46.74ng/ml,8.72±3.55,129.73±30.34ng/m1。对所收集的“针刺灌流液”进行检测,这四个指标未达均值的舍弃不用。“针刺灌流液”微量注射于去卵巢大鼠POA的实验结果表明,IOVXAP血E2显著高于IOVXP和IaCSF(P<0.05),且IOVXAP阴道涂片出现大量成熟脱落细胞,与IOVXP和IaCSF相比,存在显著差异;用“针刺灌流液”条件孵育去卵巢大鼠下丘脑脑片的结果显示,下丘脑脑片释放GnRH受到明显抑制,与加入IOVXP和IaCSF灌流液条件孵育相比,有显著差异(P<0.05)。 结论:1.去卵巢大鼠下丘脑核团微量注射“针刺灌流液”,可产生一种模拟电针调整HPOA异常功能的作用;2.“针刺灌流液”条件孵育去卵巢大鼠下丘脑脑片,可抑制脑片GnRI-I的释放;3.“针刺灌流液”可作为针刺信息分子的载体,把针刺信息转移到整体动物或离体组织上,模拟特定的针刺效应。为进一步研究针刺治疗围绝经期综合征的信号传(转)导机制提供新的实验方法。
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