【摘 要】
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嗜盐微生物在适应不同浓度的盐环境的进化过程中形成其特殊的耐盐机制,对其耐盐基因进行功能研究,对有效开发利用嗜盐微生物的基因资源具有重要意义。26S蛋白酶调节亚基7(S7)
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嗜盐微生物在适应不同浓度的盐环境的进化过程中形成其特殊的耐盐机制,对其耐盐基因进行功能研究,对有效开发利用嗜盐微生物的基因资源具有重要意义。26S蛋白酶调节亚基7(S7)在26S蛋白酶体中19S调节亚基复合体的一个亚基,具有保守功能域,参与形成ATPase活性中心,为泛素-26S蛋白酶体代谢途径中底物蛋白的去泛素化、蛋白的转运提供能量。26S蛋白酶体在生物体内参与多种生命活动的过程,如细胞分裂、细胞程序性死亡、DNA损伤的修复等,在细胞中异常蛋白的降解过程发挥重要作用。另外,溶血素蛋白具有良好的理化性质,能够在不同p H范围内保持稳定性,并且在医药方面具有应用价值。但这两个基因在抗逆功能方面尚未有报道。本研究中从一株嗜盐曲霉Aspergillus glaucus CCHA的酵母表达文库中筛选出耐盐性较强的两个基因,通过遗传转化,对其基因功能进行了探究。主要研究结果如下:1.成功克隆出嗜盐灰绿曲霉26S蛋白酶调节亚基7的全长序列,并成功获得酵母转化子p YES2-Ag S7和嗜热菌转化子p GFPGUSPlus-Ag S7,对其进行Na Cl、山梨醇胁迫处理,转化子均未表现出抗逆性,说明Ag S7基因无抗逆性功能。2.分别以曲霉c DNA文库和酵母文库菌株质粒为模板成功扩增出的非全长序列n Ag S7、NAg S7,重新转入酵母获得转化子p YES2-n Ag S7、p YES2-NAg S7,其逆境胁迫验证均未表现为胁迫敏感性,无抗逆性功能,因此推测酵母文库中该基因的酵母菌株发生突变。3.基因Ag Aeg S具有溶血蛋白家族保守功能域,获得的酵母表达菌株p YES2-Ag Aeg S及嗜热菌转化子菌株p GFPGUSPlus-Ag Aeg S在高盐渗透胁迫下表现出抗盐性,初步推断Ag Aeg S基因可能参与嗜盐灰绿曲霉对逆境胁迫的应答。以上结果表明26S蛋白酶调节亚基7基因对逆境胁迫表现敏感,未表现出耐盐特性,可能不参与生物体的抗盐机制;通过酵母表达文库筛选转化子可能存在菌株突变的因素。初步推断溶血素蛋白基因可能参与嗜盐灰绿曲霉的高盐、干旱等高渗透环境胁迫的应答。
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