通过转基因技术改良植物遗传性状,培养周期短,收益效果较好,可定向诱导改变植物性状,在农作物、观赏花卉等领域被广泛应用。漆酶可应用于造纸工业、有机合成、食品工业等领域,对环境污染影响小且效率较高。目前可使用微生物对土壤污染进行一定程度的治理,但工程菌多为转基因菌株,大量投入环境中可能产生生物污染,产生不可预见的损失,使用植物修复手段则可以避免这一情况的发生。本文以获得的血红密孔菌漆酶基因为模板,扩增获得目的基因片段,片段长度为1557 bp,编码519个氨基酸,GC%为58.15%,与GenBank中血红密孔菌漆酶cDNA序列对比,扩增得到的序列有个别碱基发生突变,但对应氨基酸并未发生较大变化。实验以PBI121植物表达载体与漆酶基因构建重组表达载体PBI121-lac,于在大肠杆菌DH5α中大量扩增表达,并转化于农杆菌菌株LBA4404中。利用农杆菌介导方法转化烟草叶片组织,优化确定影响转化效率的一系列因素。结果如下,以培养生长30 d左右的烟草无菌叶片为材料,以MS为基本培养基,通过不同浓度激素筛选最佳激素配比为1 mg/L 6-BA和0.1 mg/LNAA。以卡那霉素(kan)为选择压力筛选抗性组织,当Kan浓度大于100 mg/L时,叶片大量白化死亡,且会影响植物组织的分化速度,选取80 mg/L Kan效果较佳。通过改变转化条件比对得出,叶片预培养3 d,使用稀释30倍OD600为0.8左右的农杆菌菌液侵染5 min,共培养2 d,后期使用300mg/LCef抑菌,转化效果较好。以转化烟草总DNA为模板,重组质粒DNA为阳性对照,非转化烟草总DNA为阴性对照,使用血红密孔菌漆酶基因两端引物进行PCR,结果表明,外源基因已经成功整合入转化烟草中。转化烟草叶片的提取液可检测到一定的酶活,纯化后得到的漆酶与血红密孔菌漆酶性质相似,具有一定的染料脱色能力。