论文部分内容阅读
肉鸡腹水综合征(Ascites syndrome, AS)发生过程中,肺的病理变化表现为肿大、充血。肺组织富含血管,其血管内皮结构和功能的紊乱与其病变的发生密切相关。近年来,针对中药防治肉鸡腹水综合征的研究广泛并取得了良好效果。本试验根据本课题组前期研究结果设计,通过研究复方中药对肺组织内皮活性因子的调控作用,阐明其对肉鸡腹水综合征的防治机制。方法：试验采用低温、在饮水中添加0.12%NaCl、在饲料中添加3%猪油和4%鱼粉的多因素方法诱导AA肉鸡发生腹水模型。试验动物分为6组：空白组、模型组、复方中药高剂量组(2 mL/kg·d)、复方中药中剂量组(1mL/kg·d)、复方中药低剂量组(0.5mL/kg·d)和阳性药物组(1% L-Arg)。于15、25、35、45日龄,每组随机抽取5羽,病理解剖并取心肺组织。检测腹水心脏指数(Ascites heart index, AHI),实时荧光定量法和ELISA法测定肉鸡肺组织(按目录中的先后顺序出场写)血管黏附因子(VCAM1)、血管内皮源性因子(EGFL7、VEGF和VEGFR2)及细胞增殖信号通路中负性调控因子(SPRED1、PI3KR2)的基因和蛋白表达水平,研究复方中药对AS的防治效果及作用机制。试验结果如下：1、AS模型肉鸡精神萎靡,肢体倦怠；腹部膨大且皮肤变薄发亮,触之有波动感,剖解时可抽出200-500mL不等的黄色积液,有的清亮透明,有的混有絮状物；剖解可见心包积液,右心肥大,肝、肺肿大,充血或瘀血,部分鸡肾脏肿大、充血。2、与空白组相比,25、35、45日龄模型组AHI显著升高(P<0.01)：与模型组相比,25、35、45日龄复方中药高剂量组、中剂量组和L-Arg组AHI显著降低(P<0.01,P<0.05)。3、与空白组相比，各检测日龄模型组肺组织EGFL7 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,各检测日龄复方中药高剂量组和L-Arg组肺组织EGFL7 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),15、25、35日龄复方中药中剂量组以及35日龄复方中药低剂量组肺组织EGFL7 mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01)。与空白组相比,各检测日龄模型组肺组织EGFL7蛋白表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,各检测日龄复方中药高剂量组肺组织EGFL7蛋白表达量显著降低(P<0.01,P<0.05),15、25、35日龄复方中药中剂量组和L-Arg组以及15日龄复方中药低剂量组肺组织EGFL7蛋白表达量显著降低(P<0.01)。4、与空白组相比,25、35、45日龄模型组肺组织VEGF mRNA相对表达量显著升高(P<0.01)：与模型组相比,25、35、45日龄复方中药高剂量组、中剂量组和L-Arg组肺组织VEGF mRNA目对表达量显著降低(P<0.01,P<0.05)。与空白组相比,各检测日龄模型组肺组织VEGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,各检测日龄复方中药高剂量组和L-Arg组肺组织VEGF蛋白表达量显著降低(P)<0.01),15、35、45日龄复方中药中剂量组肺组织VEGF蛋白表达量显著降低(P<0.01)。5、与空白组相比,各检测日龄模型组肺组织VEGFR2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,15、25、45日龄复方中药高剂量组和L-Arg组肺组织VEGFR2 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),25、35、45日龄复方中药中剂量组肺组织VEGFR2 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),15、45日龄复方中药低剂量组肺组织VEGFR2 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01)。与空白组相比,各检测日龄模型组肺组织VEGFR2蛋白表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,各检测日龄复方中药高剂量组肺组织VEGFR2蛋白表达量显著降低(P<0.01,P<0.05),25、35日龄复方中药中剂量组以及35、45日龄L-Arg组肺组织VEGFR2蛋白表达量显著降低(P<0.01)。6、与空白组相比,各检测日龄模型组肺组织VCAM1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,各检测日龄复方中药高剂量组肺组织VCAM1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),15、25日龄复方中药中剂量组以及15、25、35日龄L-Arg组肺组织VCAM1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01,P<0.05)。与空白组相比,各检测日龄模型组肺组织VCAM1蛋白表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,各检测日龄复方中药高剂量组、中剂量组和L-Arg组肺组织VCAM1蛋白表达量显著降低(P<0.01),15、35日龄复方中药低剂量组肺组织VCAM1蛋白表达量显著降低(P<0.05)。7、与空白组相比,25、35、45日龄模型组肺组织SPRED1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01)：与模型组相比,25、35、45日龄复方中药高剂量组肺组织SPRED1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),45日龄复方中药中剂量组SPRED1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),25、45日龄L-Arg组肺组织SPRED1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01,P<0.05)。与空白组相比,25、35、45日龄模型组肺组织SPRED1蛋白表达量显著降低(P<0.01)；与模型组相比,35、45日龄复方中药高剂量组和L-Arg组肺组织SPRED1蛋白表达量显著升高(P<0.01,P<0.05),45日龄复方中药中剂量组、低剂量组肺组织SPRED1蛋白表达量显著升高(P<0.05)。8、与空白组相比,25、35、45日龄模型组肺组织PI3KR2 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01)；与模型组相比,25、35、45日龄复方中药高剂量组和L-Arg组肺组织PI3KR2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),35日龄复方中药中剂量组以及45日龄复方中药低剂量组肺组织PI3KR2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。与空白组相比,各检测日龄模型组肺组织PI3KR2蛋白表达量显著降低(P<0.01)；与模型组相比,各检测日龄复方中药高剂量组、中剂量组和L-Arg组肺组织PI3KR2蛋白表达量显著升高(P<0.01,P<0.05)。9、与空白组相比，35日龄模型组肺组织miR-126-3p相对表达量显著升高(P<0.01)；与模型组相比,35日龄复方中药高剂量组肺组织miR-126-3p相对表达量显著降低(P<0.01)。结论：1.AS肉鸡肺组织VCAM1、EGFL7、VEGF、VEGFR2 mRNA相对表达量和蛋白表达量升高,SPRED1、PI3KR2 mRNA相对表达量和蛋白表达量下降,miR-126-3p相对表达量升高,它们参与了AS病变发生发展；2.本试验所用复方中药能下调AS肉鸡肺组织VCAM1、EGFL7、VEGF、VEGFR2mRNA相对表达量和蛋白表达量,上调SPRED1、PI3KR2 mRNA相对表达量和蛋白表达量,下调miR-126-3p表达量,复方中药对AS肉鸡肺组织内皮活性因子具有调控作用,是其有效防治AS病变的机制之一。