【摘 要】
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目的本研究通过分析在瘢痕疙瘩组织和正常皮肤组织的成纤维细胞中,CD26阳性（CD26+）和阴性（CD26-）细胞亚群的数量和功能的表达差异,利用CD26分子特异性抑制剂对瘢痕疙瘩CD26+成纤维细胞的纤维化作用进行抑制,期望在细胞水平确定瘢痕疙瘩治疗中的靶细胞群,并为瘢痕疙瘩的临床治疗提供新的方向。方法1.利用流式分析技术,以瘢痕疙瘩组织中成纤维细胞（Keloid Fibroblasts,KFs）
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目的本研究通过分析在瘢痕疙瘩组织和正常皮肤组织的成纤维细胞中,CD26阳性（CD26+）和阴性（CD26-）细胞亚群的数量和功能的表达差异,利用CD26分子特异性抑制剂对瘢痕疙瘩CD26+成纤维细胞的纤维化作用进行抑制,期望在细胞水平确定瘢痕疙瘩治疗中的靶细胞群,并为瘢痕疙瘩的临床治疗提供新的方向。方法1.利用流式分析技术,以瘢痕疙瘩组织中成纤维细胞（Keloid Fibroblasts,KFs）为实验组（n=10）,正常皮肤组织中成纤维细胞（Normal Fibroblasts,NFs）为对照组（n=10）,检测CD26分子分别在两组细胞中的表达率。2.将取自临床患者的瘢痕疙瘩组织和正常皮肤组织经分离消化后获得成纤维细胞,再根据CD26表达的不同对病变瘢痕疙瘩组织和正常组织中的成纤维细胞利用流式分选技术将细胞分为四组:KFs CD26+;KFs CD26-;NFs CD26+;NFs CD26-。分选后细胞常规连续培养一周,通过CCK-8实验和Ki-67荧光染色分析各组细胞增殖能力。应用Realtime PCR技术、Western Blotting技术、ELISA技术和细胞荧光染色技术分析各组细胞在纤维化相关细胞因子和细胞外基质的表达。通过划痕实验研究各组细胞的侵袭能力。3.采用CD26分子的变构抑制剂Diprotin A,在体外不同浓度下培养CD26+KFs,并分析抑制效果。结果1.CD26分子在KFs中的表达率（46.65±13.97）%明显高于在NFs中的表达率（24.75±16.85）%,两者之间存在显著差异（P＜0.01）。2.经流式分选后NFs与KFs组CD26+与CD26-细胞,经过7天体外培养后,细胞形态均无明显差异;两组中CD26+细胞亚群都比CD26-细胞亚群表现出更活跃的细胞增殖能力。3.在m RNA水平和蛋白表达水平,NFs与KFs组中CD26+细胞在瘢痕疙瘩相关细胞因子TGF-β1、IGF-1和IL-6,以及细胞外基质COL1、COL 3和FN中都比CD26-细胞有更高的表达。4.在NFs和KFs组中CD26+细胞亚群比CD26-细胞亚群有更强的细胞侵袭能力。5.Diprotin A可以抑制瘢痕疙瘩CD26+成纤维细胞的细胞外基质合成和瘢痕疙瘩相关细胞因子的表达,并且抑制CD26+细胞侵袭能力。结论本实验证明在瘢痕疙瘩组织成纤维细胞中CD26分子的表达明显高于正常皮肤中的成纤维细胞,同时CD26+成纤维细胞在瘢痕疙瘩纤维化中起主要作用。利用CD26分子抑制剂可以有效在体外抑制成纤维细胞表达疾病相关物质。本实验在细胞学水平为深入研究瘢痕疙瘩的病理机制以及探索新的临床治疗方法提供了新的途径和思路。
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