肉苁蓉及其寄主梭梭的转录组学测序及转移RNA的初步分析

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肉苁蓉(Cistanche deserticola Ma,Cis)属于列当科肉苁蓉属,是多年生全寄生性草本植物,专性寄生于藜科小乔木梭梭(Haloxylon ammodendron,HA)根部。肉苁蓉具有极高的药用价值,有"沙漠人参"之称。梭梭是一种十分重要的抗旱固沙植物,对干旱地区的生态环境有着举足轻重的作用。目前对于肉苁蓉和梭梭的研究只停留在药用价值的开发和生物活性成分的分离等方面,对其遗传物质和分子水平的研究则鲜有报道。而本研究的主要目标就是通过转录组测序手段丰富肉苁蓉和梭梭的遗传信息并揭示它们之间可能的RNA转移事件。本研究以内蒙古巴彦淖尔市采集的肉苁蓉和梭梭为实验材料,利用Illumina高通量测序平台对其进行转录组测序,极大的丰富了肉苁蓉与梭梭的转录组数据,并为未来肉苁蓉和梭梭分子水平的研究奠定了基础。同时,通过对转录组测序结果的生物信息学分析,以及对分析结果的分子生物学验证,可以探究肉苁蓉和梭梭之间是否存在着RNA的转移。主要研究成果如下:1.本研究首次运用Illumina高通量测序平台对肉苁蓉和梭梭进行了转录组测序,得到了 750,000,000多条梭梭与肉苁蓉的转录组原始数据(rawreads),剔除低质量数据后剩余723,000,000多条,组装后获得长度为200~500 bp的Unigene共130,000多条、长度为500~1,000 bp 的 Unigene 共 30,000 多条,长度为 1,000~2,000 bp 的 Unigene 共25,000多条,长度大于2,000 bp的Unigene共17,000多条,总共222,899条Unigene,其中属于独立生长的梭梭的有95,123条,寄生了肉苁蓉的梭梭108,575条,肉苁蓉85,131条,肉苁蓉与梭梭之间的吸器56,084条。2.①利用Perl语言编程筛选出16,860条可能是肉苁蓉与梭梭相互转移的Unigene,2712条可能是梭梭转移到肉苁蓉的Unigene。这些筛选出来的Unigene还可能是梭梭被肉苁蓉寄生后受激表达的,具有十分重要的研究价值。②利用Python语言在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中进行了数万次的比对,筛选出肉苁蓉转移到梭梭的Unigene共454条,梭梭转移到肉苁蓉的Unigene共5016条。③利用本地Blast系统将筛选出的Unigene与列当科11个数据库和藜科7个数据库进行比对,找到了 15条Unigene与列当科数据库均有高度同源序列,与藜科数据库均无相似序列,可能为肉苁蓉转移到梭梭的Unigene;33条Unigene与藜科数据库有高度同源序列而与列当科没有,证明是梭梭转移到肉苁蓉的Unigene。用数据证明了梭梭肉苁蓉间存在着大量的信息交换。3.利用不同模版的PCR检验和DNA测序验证发现有4条Unigene符合肉苁蓉转移到梭梭的结果预期,用实验证明了梭梭与肉苁蓉之间存在着RNA的转移。
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