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目的模拟内源性miRNA，设计靶向hTERT和VEGF基因的人工miRNA，构建表达该miRNA前体的重组质粒，初步验证其在鼻咽癌细胞中对这两种基因表达的抑制作用，并筛选出其中最为有效的质粒，为后续的体内和体外实验奠定基础。方法采用软件设计表达miRNA前体的寡核苷酸序列，退火后与质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR连接，并进行测序。所得质粒经脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞，荧光显微镜观察转染效果。RT-PCR及Westem blotting检测转染后靶基因的表达情况。结果构建了3种靶向hTERT基因的miRNA重组质粒即pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT2035、pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT3010、pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT3100和3种靶向VEGF基因的miRNA重组质粒即pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-VEGF1022、pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-VEGF1025、pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-VEGF1035，其测序结果与软件设计一致。将质粒转染CNE-2细胞后，在荧光显微镜下观察到绿色荧光，证明转染成功，质粒在细胞中得到表达。通过RT-PCR检测转染后靶基因的mRNA水平时发现，转染质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT2035及pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-VEGF1025的CNE-2细胞，其RT-PCR产物明显减少，说明靶基因的mRNA水平下调，基因表达受抑。通过Westem Blotting检测转染后靶基因的蛋白表达水平，发现在6种转染后的CNE-2细胞中，靶基因的蛋白条带均减弱，说明miRNA重组质粒对蛋白表达有抑制作用，其中以转染pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT2035及pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-VEGF1025的细胞其靶基因的蛋白减少较明显，提示hTERT mRNA位点2035～2055和VEGF mRNA位点1025～1045为抑制基因表达较好的位点。结论成功构建了6种分别靶向hTERT和VEGF的miRNA重组质粒，初步筛选出对基因表达抑制作用最强的两种质粒，为miRNA治疗鼻咽癌的进一步研究奠定了基础。