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目的:将脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎性牙槽骨骨髓间充质干细胞(Alveolar bone marrow mesenchymal stem cells,Al-BMSCs)经过Er:YAG激光、Nd:YAG激光及双波长激光照射处理后接种于钛片表面,应用CCK-8法、扫描电镜观察(Scanning election microscopy,SEM)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative Real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)等实验方法,检测正常和炎性Al-BMSCs在钛片表面增殖情况、生长形态以及炎性因子IL-6(Interleukin-6,IL-6)、IL-8(Interleukin-8,IL-8)和成骨相关基因Runx2(Runt-related transcription factor 2,Runt相关转录因子2)、ALP(Alkaline phosphatase,碱性磷酸酶)的表达,为双波长激光辅助治疗种植体周炎提供理论依据和实验数据。方法:1.Al-BMSCs培养、鉴定:收集来自河北医科大学口腔医院口腔颌面外科健康人第三磨牙拔除后颊舌侧骨板及周围骨组织碎片,采用酶消化法获取原代Al-BMSCs,使用反复差速离心法进一步纯化细胞,原代细胞2-3天换液一次,待细胞密度达80%左右,进行原代细胞传代培养,将3-5代细胞用于后续实验。倒置显微镜观察细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞表型;茜素红染色和ALP染色鉴定Al-BMSCs成骨分化能力。取对数生长期的Al-BMSCs,在细胞贴壁后1-6天采用CCK-8试剂盒检测吸光度,根据细胞增殖曲线检测细胞活性。2.实验试剂及配件制备:配备实验所需的LPS和钛片。实验分组:根据不同干预条件分为5组:正常组(C)、脂多糖组(L)、脂多糖+Er:YAG激光组(L+E)、脂多糖+Nd:YAG激光组(L+N)、脂多糖+Er:YAG激光+Nd:YAG激光组(L+E+N)。Al-BMSCs按不同分组处理后,计数,接种至钛片。在1、3、5、7天,使用CCK-8试剂盒检测吸光度,观察细胞在钛片增殖情况。3.扫描电镜观察各组细胞在钛片附着情况:将5组细胞分别接种至钛片,培养24h后,对各组样本表面Al-BMSCs的附着情况进行扫描电镜观察,并拍摄照片。q RT-PCR测定各组细胞炎症因子IL-6、IL-8 m RNA的表达水平:将5组细胞分别接种至钛片,培养12h、24h后,提取RNA,进行逆转录及实时荧光定量PCR扩增,检测细胞炎性因子IL-6、IL-8 m RNA的表达水平。q RT-PCR测定成骨诱导7、14d后各组细胞成骨基因Runx2、ALP m RNA的表达:将5组细胞分别接种至钛片,24h后,更换为成骨诱导液,每3天换一次液,7d、14d后,提取各组RNA,进行逆转录及实时荧光定量PCR扩增,检测各组细胞成骨基因Runx2、ALP m RNA的表达水平。采用SPSS 21.0软件包进行统计学分析。结果:1.采用酶消化法体外培养的Al-BMSCs表现为典型的骨髓间充质干细形态;经流式细胞鉴定:CD44、CD29高表达,CD45低表达,符合骨髓间充质干细胞的表面标志物表达;Al-BMSCs生长曲线基本符合正常细胞生长曲线;定向诱导成骨细胞分化,茜素红染色可见明显矿化结节,ALP染色可见碱性磷酸酶活性部位呈蓝紫色。2.扫描电镜观察5组细胞在钛片生长粘附均良好,呈平铺状态,细胞整体形态呈现梭形、不规则的多角形。C组细胞最为密集,胞体最为丰满,伸出的伪足丰富;L组细胞最稀;L+E、L+N组细胞密度略低于C组细胞,伸出的伪足较少,较细长;L+E+N组与L+E组、L+N组密度相似,但L+E+N组胞体更饱满,具有2条以上伪足。3.各组CCK-8增殖实验结果显示,第1天时,和C组相比其余4组细胞增殖能力受到抑制(P<0.05),第6天,L+E+N组OD值接近C组(P>0.05),其他三组OD值均低于C组(P<0.05)。4.q RT-PCR结果显示,12h时,L、L+N、L+E、L+E+N组的IL-6 m RNA的表达水平显著高于C组(P<0.05),24h时,L+E+N组IL-6 m RNA的表达水平低于L、L+N、L+E组(P<0.01);12、24h时,L、L+N、L+E组IL-8 m RNA的表达水平均高于C组(P<0.05),但L+E+N组和C组IL-8 m RNA的表达水平无明显差异(P>0.05)且L+E+N组的IL-8 m RNA的表达水平显著低于L组(P<0.0001)。5.q RT-PCR结果显示,5组细胞的ALP、Runx2 m RNA的表达量均随时间而增加。7d时,L、L+N、L+E、L+E+N组ALP m RNA的表达水平均低于C组(P<0.05),14d时,L+N、L+E+N组与C组ALP m RNA的表达无明显差异(P>0.05);7d时,L+E+N组的Runx2 m RNA的表达量显著高于L组(P<0.001),14d时,L、L+N、L+E、L+E+N组和C组相比,Runx2 m RNA的表达量无明显差异(P>0.05),L+E+N组的Runx2 m RNA的表达量显著高于L组(P<0.01)。结论:1.所培养的细胞符合骨髓间充质干细胞的表达,经成骨分化诱导后染色,鉴定为牙槽骨骨髓间充质干细胞。2.Er:YAG激光和Nd:YAG激光均对钛表面炎性Al-BMSCs炎症相关基因的表达有抑制作用,双波长激光处理可更有效抑制Al-BMSCs炎症因子的表达。3.Er:YAG激光和Nd:YAG激光均对钛表面炎性Al-BMSCs成骨相关基因的表达有促进作用,双波长激光处理可更有效促进Al-BMSCs成骨相关基因的表达。