双波长激光处理对炎性人骨髓间充质干细胞在钛表面增殖和成骨分化的影响

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tangbao1006
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:将脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎性牙槽骨骨髓间充质干细胞(Alveolar bone marrow mesenchymal stem cells,Al-BMSCs)经过Er:YAG激光、Nd:YAG激光及双波长激光照射处理后接种于钛片表面,应用CCK-8法、扫描电镜观察(Scanning election microscopy,SEM)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative Real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)等实验方法,检测正常和炎性Al-BMSCs在钛片表面增殖情况、生长形态以及炎性因子IL-6(Interleukin-6,IL-6)、IL-8(Interleukin-8,IL-8)和成骨相关基因Runx2(Runt-related transcription factor 2,Runt相关转录因子2)、ALP(Alkaline phosphatase,碱性磷酸酶)的表达,为双波长激光辅助治疗种植体周炎提供理论依据和实验数据。方法:1.Al-BMSCs培养、鉴定:收集来自河北医科大学口腔医院口腔颌面外科健康人第三磨牙拔除后颊舌侧骨板及周围骨组织碎片,采用酶消化法获取原代Al-BMSCs,使用反复差速离心法进一步纯化细胞,原代细胞2-3天换液一次,待细胞密度达80%左右,进行原代细胞传代培养,将3-5代细胞用于后续实验。倒置显微镜观察细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞表型;茜素红染色和ALP染色鉴定Al-BMSCs成骨分化能力。取对数生长期的Al-BMSCs,在细胞贴壁后1-6天采用CCK-8试剂盒检测吸光度,根据细胞增殖曲线检测细胞活性。2.实验试剂及配件制备:配备实验所需的LPS和钛片。实验分组:根据不同干预条件分为5组:正常组(C)、脂多糖组(L)、脂多糖+Er:YAG激光组(L+E)、脂多糖+Nd:YAG激光组(L+N)、脂多糖+Er:YAG激光+Nd:YAG激光组(L+E+N)。Al-BMSCs按不同分组处理后,计数,接种至钛片。在1、3、5、7天,使用CCK-8试剂盒检测吸光度,观察细胞在钛片增殖情况。3.扫描电镜观察各组细胞在钛片附着情况:将5组细胞分别接种至钛片,培养24h后,对各组样本表面Al-BMSCs的附着情况进行扫描电镜观察,并拍摄照片。q RT-PCR测定各组细胞炎症因子IL-6、IL-8 m RNA的表达水平:将5组细胞分别接种至钛片,培养12h、24h后,提取RNA,进行逆转录及实时荧光定量PCR扩增,检测细胞炎性因子IL-6、IL-8 m RNA的表达水平。q RT-PCR测定成骨诱导7、14d后各组细胞成骨基因Runx2、ALP m RNA的表达:将5组细胞分别接种至钛片,24h后,更换为成骨诱导液,每3天换一次液,7d、14d后,提取各组RNA,进行逆转录及实时荧光定量PCR扩增,检测各组细胞成骨基因Runx2、ALP m RNA的表达水平。采用SPSS 21.0软件包进行统计学分析。结果:1.采用酶消化法体外培养的Al-BMSCs表现为典型的骨髓间充质干细形态;经流式细胞鉴定:CD44、CD29高表达,CD45低表达,符合骨髓间充质干细胞的表面标志物表达;Al-BMSCs生长曲线基本符合正常细胞生长曲线;定向诱导成骨细胞分化,茜素红染色可见明显矿化结节,ALP染色可见碱性磷酸酶活性部位呈蓝紫色。2.扫描电镜观察5组细胞在钛片生长粘附均良好,呈平铺状态,细胞整体形态呈现梭形、不规则的多角形。C组细胞最为密集,胞体最为丰满,伸出的伪足丰富;L组细胞最稀;L+E、L+N组细胞密度略低于C组细胞,伸出的伪足较少,较细长;L+E+N组与L+E组、L+N组密度相似,但L+E+N组胞体更饱满,具有2条以上伪足。3.各组CCK-8增殖实验结果显示,第1天时,和C组相比其余4组细胞增殖能力受到抑制(P<0.05),第6天,L+E+N组OD值接近C组(P>0.05),其他三组OD值均低于C组(P<0.05)。4.q RT-PCR结果显示,12h时,L、L+N、L+E、L+E+N组的IL-6 m RNA的表达水平显著高于C组(P<0.05),24h时,L+E+N组IL-6 m RNA的表达水平低于L、L+N、L+E组(P<0.01);12、24h时,L、L+N、L+E组IL-8 m RNA的表达水平均高于C组(P<0.05),但L+E+N组和C组IL-8 m RNA的表达水平无明显差异(P>0.05)且L+E+N组的IL-8 m RNA的表达水平显著低于L组(P<0.0001)。5.q RT-PCR结果显示,5组细胞的ALP、Runx2 m RNA的表达量均随时间而增加。7d时,L、L+N、L+E、L+E+N组ALP m RNA的表达水平均低于C组(P<0.05),14d时,L+N、L+E+N组与C组ALP m RNA的表达无明显差异(P>0.05);7d时,L+E+N组的Runx2 m RNA的表达量显著高于L组(P<0.001),14d时,L、L+N、L+E、L+E+N组和C组相比,Runx2 m RNA的表达量无明显差异(P>0.05),L+E+N组的Runx2 m RNA的表达量显著高于L组(P<0.01)。结论:1.所培养的细胞符合骨髓间充质干细胞的表达,经成骨分化诱导后染色,鉴定为牙槽骨骨髓间充质干细胞。2.Er:YAG激光和Nd:YAG激光均对钛表面炎性Al-BMSCs炎症相关基因的表达有抑制作用,双波长激光处理可更有效抑制Al-BMSCs炎症因子的表达。3.Er:YAG激光和Nd:YAG激光均对钛表面炎性Al-BMSCs成骨相关基因的表达有促进作用,双波长激光处理可更有效促进Al-BMSCs成骨相关基因的表达。
其他文献
目的:对HER2阳性晚期乳腺癌人群进行回顾性分析,筛选出影响患者生存的独立预后因素,建立可靠、便捷的预后模型。方法:收集2010年1月至2019年12月就诊于河北医科大学第四医院的乳腺癌患者,选取符合入组条件的患者102例,均为接受过曲妥珠单抗治疗的HER2阳性晚期乳腺癌患者。收集患者的相关临床病理资料,将入组人群按1:1的比例随机分为训练集与验证集两组。经SPSS 21.0对训练集人群的总生存期
学位
目的:基于唇腭裂患者术后易出现阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(Obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)的现象,本试验通过三维重建评估单侧完全性唇腭裂(Unilateral complete cleft lip and p alate,UCLP)患者术后气道,旨在探究此类患者术后气道体积及相关因素,以期为唇腭裂患者的治疗提供理论依据。方法:采用
学位
目的:通过分离、培养、鉴定人牙髓干细胞(Human dental pulp stem cells,h DPSCs),观察转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、三氧化矿物凝聚体(Mineral trioxide aggregate,MTA)单独应用、联合应用对人牙髓干细胞增殖及成骨/成牙本质分化的影响,以期为TGF-β1、MTA促进体外培养人牙
学位
目的:观察胸段食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)根治性放疗/放化疗患者治疗前、后外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)及血小板与淋巴细胞比值(platelet to lymphocyte ratio,PLR)变化与心脏受照剂量的关系及其对预后的影响。方法:回顾性分析2014年1月
学位
目的:骨性Ⅲ类偏斜畸形是一种表现复杂,临床矫治困难的错畸形,其发生发展一般受遗传与环境因素的共同影响。颅底作为颅面复合体的一部分,其与错畸形的内在联系一直受到正畸学者的关注。本研究基于锥形束CT(CBCT)检测数据,系统性研究成人骨性Ⅲ类偏斜畸形患者颅底与下颌骨形态特征,进一步探索成人骨性Ⅲ类偏畸形患者颅底形态与颌面骨骼对称性的关系。方法:1.选取2015-2021年间于河北医科大学口腔医院
学位
目的:体外建立白色念珠菌和热带念珠菌混合生物膜模型,研究不同参数下光活化消毒(Photo-activated disinfection,PAD)技术对混合生物膜的影响。方法:1.构建白色念珠菌和热带念珠菌混合生物膜模型将相同浓度的白色念珠菌标准株SC5314和热带念珠菌标准株ATCC750以1:1比例接种于96孔细胞培养板和玻璃底细胞培养皿,以此培养混合生物膜。通过银染色结合光学显微镜、FITC-
学位
目的:牙周组织再生对于修复牙周软硬组织缺损来说具有重要意义,而选取合适的种子细胞是实现良好再生的前提。近年来,牙源性间充质干细胞(Dental-derived mesenchymal stem cells,DMSCs)的发现及应用使牙周组织再生取得了关键进展,这些干细胞主要来源于牙龈、牙髓、牙周膜、脱落的乳牙、根尖乳头及牙囊组织。而在诸多细胞中,人牙龈干细胞(Human gingival mese
学位
目的:唾液腺功能退化严重影响患者的生活质量与水平,从根本上解决唾液腺退化仍是医学上的一大难题。随着再生医学的发展,自体腺上皮样细胞注射为解决唾液腺功能退化提供一种新的治疗方案。本实验旨在研究牙髓干细胞诱导来源腺上皮样细胞与腺上皮细胞及牙髓干细胞之间在超微结构上的异同之处及其功能变化,为再生医学治疗唾液腺功能退化提供新的治疗思路。方法:1.原代细胞的培养与鉴定1.1牙髓干细胞培养与鉴定:收集人牙髓组
学位
目的:探究人颌骨间充质干细胞(Human jaw bone mesenchymal stem cell,hJBMSCs)的体外培养方法,采用Cell Counting Kit-8(CCK8)、流式细胞仪、实时荧光定量PCR等技术对上、下颌骨间充质干细胞的增殖、分化能力比较,为颌骨来源间充质干细胞在组织工程中的应用提供研究基础。方法:1.实验分组根据实验取材位置不同,进行如下分组:hJBMSCs-U
学位
目的:测定不同能量的铒激光(Erbium:Yttrium Aluminum Garnet,Er:YAG laser)对人根尖牙乳头干细胞(human stem cells from apical papilla,h SCAPs)增殖、迁移和早期成骨分化的影响,为Er:YAG激光辅助年轻恒牙根管治疗提供理论依据和实验数据。方法:1.不同能量的Er:YAG激光对h SCAPs增殖能力的影响:选用第4~
学位