【摘 要】
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目的:测定不同能量的铒激光（Erbium:Yttrium Aluminum Garnet,Er:YAG laser）对人根尖牙乳头干细胞（human stem cells from apical papilla,h SCAPs）增殖、迁移和早期成骨分化的影响,为Er:YAG激光辅助年轻恒牙根管治疗提供理论依据和实验数据。方法:1.不同能量的Er:YAG激光对h SCAPs增殖能力的影响:选用第4～
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目的:测定不同能量的铒激光（Erbium:Yttrium Aluminum Garnet,Er:YAG laser）对人根尖牙乳头干细胞（human stem cells from apical papilla,h SCAPs）增殖、迁移和早期成骨分化的影响,为Er:YAG激光辅助年轻恒牙根管治疗提供理论依据和实验数据。方法:1.不同能量的Er:YAG激光对h SCAPs增殖能力的影响:选用第4～6代人h SCAPs,然后按不同照射能量（0m J、20m J、40m J、60m J/脉冲,90s）照射细胞。采用CCK-8法对1、3、5天的各组细胞的光密度值（Optical density,OD）进行测定,研究其增殖能力。2.不同能量的Er:YAG激光对h SCAPs迁移的影响:用不同能量的E r:YAG激光（0m J、20m J、40m J、60m J/脉冲,90s）照射h SCAPs,于划痕后0h、24h在显微镜下拍照,采用Image J软件测量并以S0、S24记录各组细胞0h、24h的愈合面积,应用(S0-S24)/S0公式计算各组不同时间内的相对愈合面积。3.不同能量的Er:YAG激光对h SCAPs成骨分化能力的测定:采用不同能量的激光（0m J、20m J、40m J、60m J/脉冲,90s）照射培养于成骨诱导液中的h SCAPs,通过Quantitative Real-time PCR测定各组细胞在第5天成骨相关基因DSPP（Dentin sialophosphoprotein）、Runx2（Runt-related transcription factor-2）、ALP（Alkaline phosphatase）的表达;21天后茜素红染色法观察不同能量的Er:YAG激光对h SCAPs成骨分化的作用,采用Image pro plus图文分析软件测量染色区面积,计算显微镜下相同条件视野内钙化结节染色面积占比。结果:1.CCK-8检测结果显示:在Er:YAG激光照射后1d,各组细胞的吸光度值与对照组相比均没有统计学差异（P＞0.05）。在第3d,与对照组相比,各实验组均能增强细胞的增殖活性,但只有20m J组（P＜0.001）和40m J组（P＜0.01）与对照组相比有统计学差异。在激光照射后第5d,20m J组（P＜0.01）和40m J组（P＜0.05）均能增强细胞的增殖活性,且Er:YAG激光为20m J/脉冲时,最能促进细胞的增殖。60m J组细胞增殖较对照组低,差异无显著性（P＞0.05）。各实验组间两两比较均有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）。2.细胞迁移实验结果显示:镜下观,0h时各组均有一条相同宽度的划痕区,24h后与对照组比较,Er:YAG激光照射能量为20m J、40m J/脉冲,辐照时间为90s时,划痕相对愈合面积均显著高于对照组（P＜0.001）,划痕区域迁入的细胞增多,细胞迁移的速度加快。60m J/脉冲组划痕愈合面积稍高于对照组（P＞0.05）。3.Quantitative Real-time PCR结果显示:激光照射能量为20m J/脉冲,时间为90s时,在第5d成骨相关基因Runx2、DSPP、ALP表达均高于对照组（P＜0.01或P＜0.001）;激光能量为40m J/脉冲,时间为90s时,Runx2、DSPP、ALP的表达均高于未接受激光照射组,但只有DSPP有统计学差异（P＜0.01）;激光能量为60m J/脉冲,时间为90s时,Runx2、DSPP、AL P表达均低于不接受激光照射组,其中只有ALP的表达量具有统计学差异（P＜0.05）。4.茜素红染色结果显示:Er:YAG激光能量为20m J、40m J/脉冲,照射时间为90s时都有明显的矿化结节形成,其中20m J组所形成结节的面积最大,而60m J组形成的矿化结节不明显。Image pro plus图文分析软件分析结果:与对照组（0m J）相比,实验组（20m J、40m J）茜素红染色面积占比的差异均具有统计学意义（P＜0.001）,其中20m J、40m J组的茜素红染色面积占比高于对照组,而60m J组的低于对照组（P＞0.05）。结论:1.Er:YAG激光对h SCAPs增殖及迁移速度的影响作用与照射能量有关,照射能量为20m J/脉冲和40m J/脉冲,照射时间为90s时,可促进细胞增殖及迁移。2.Er:YAG激光对h SCAPs成骨分化的影响作用与照射能量有关,当照射能量为20m J/脉冲,照射时间为90s时,能促进h SCAPs的成骨分化能力。
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