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目的:紫杉醇(PTX)为肺癌治疗一线药物,然而PTX注射液因采用聚氧乙烯蓖麻油及无水乙醇(1:1)作为溶媒,容易导致超敏反应、肾毒性、神经毒性等不良反应,限制了 PTX的临床应用。大量研究表明,中药单体姜黄素(CUR)与PTX联用具有增加癌细胞抑制作用。CUR是一种安全具有多靶点抗肿瘤的候选药物。但CUR因为溶解性差、生物利用度低等原因,限制了其临床应用。因此,发展一种更安全、更有效的CUR-PTX复方新剂型,以期达到增加癌细胞抑制作用,对肺癌新药研发具有十分重要意义。方法:1.采用薄膜分散制备法制备CUR纳米脂质体(CUR-LN)、PTX纳米脂质体(PTX-LN),并对处方、工艺进行单因素试验和正交试验考察,筛选出最优处方。2.用MTT法检测CUR、PTX不同浓度和不同比例(5:1、10:1、40:1、80:l,w/w)对肺癌A549、A549-T细胞株作用72h的增殖抑制作用;MTT法检测 CUR-LN、PTX-LN 不同浓度和不同比例(5:1、10:1、40:1、80:1,w/w)对肺癌A549、A549-T细胞株作用72 h的增殖抑制作用。3.用激光共聚焦检测CUR、PTX、CUR+PTX作用于A549及A549-T细胞的靶部位。4.用流式细胞仪检测CUR、PTX、CUR+PTX对A549、A549-T的诱导凋亡作用。5.选用大鼠为动物模型,通过尾静脉分别给予CUR(30mg/kg)、PTX(30mg/kg)、CUR-PTX(30:30,w/w)、CUR-LN(含 CUR30mg/kg)、PTX-LN(含 PTX30mg/kg)及 CUR-LN-PTX-LN(含 CUR:PTX,30:30)并于 5、10、15、30、45、60、120、240、480 和 1440min采血,样品经处理后HPLC测定血药浓度,药代动力学软件DAS 2.0计算药动学参数。结果:1.采用薄膜分散制备法制备CUR-LN,经单因素试验考察暂定的工艺为旋转蒸发温度45℃,探头超声时间7min,超声强度50%;暂定的处方是PVPK15:30mg,HSPC:60mg,CUR:5mg。通过正交试验筛选的最佳处方为CUR:5mg,PVPK15:25mg,HSPC:55mg。采用薄膜分散制备法制备PTX-LN,经单因素试验考察暂定的工艺为旋转蒸发温度35℃,探头超声时间5 min,超声强度50%;暂定的处方为:HSPC:25 mg,F68:50 mg,PTX:5 mg。通过正交试验选出最佳处方工艺为HSPC:17.14mg,F68:42.86mg,超声强度:55%,超声时间:6min,PTX:5mg。2.对于A549细胞,随着CUR:PTX的比例的增加,联合给药的IC50的与CUR相比活性提高4.58-1.40。随着CUR:PTX的比例的增加,联合给药的IC50与PTX相比的活性提高了 52.38-250.89。将CUR-LN和PTX-LN按照不同比例联合用药后,与CUR、CUR-LN、PTX、PTX-LN比,IC50活性分别提高了 11.07-2.11 倍、11.07-2.11 倍、132.42-397.25 倍、4.47-13.42倍。对于A549-T细胞,随着CUR:PTX的比例的增加,联合给药的IC50与CUR相比的活性提高了 2.95-1.50。随着CUR:PTX的比例的增加,联合给药的IC50与PTX相比的活性提高了 38.00-285.00。将CUR-LN和PTX-LN按照不同比例联合用药于A549-T细胞后,与CUR、CUR-LN、PTX、PTX-LN相比,IC50活性分别提高了 7.35-2.30 倍、5.81-1.82 倍、95.00-482.31 倍、21.29-108.08 倍。3.CUR主要显色在A549的细胞核,CUR主要显色在A549-T的细胞核与细胞质,PTX显色主要在A549与A549-T的细胞质,CUR+PTX在A549与A549-T的显色在细胞核与细胞质,且显色强度增加。4.10、20、40μg/mL的PTX在24h对A549诱导的细胞凋亡率分别为20.61%、44.50%、46.79%。5、10、20μg/mL 的 CUR 在 24h 对 A549 诱导的细胞凋亡率分别为 23.56%、32.60%、40.26%,5 μg/mL(CUR)+1μg/mL(PTX)、10 μg/mL(CUR)+2 μg/mL(PTX)、20 μg/mL(CUR)+4 μg/mL(PTX)对A549诱导的细胞凋亡率分别为24.58%、50.95%、72.35%。10、20、40μg/mL的PTX在24h对A549-T诱导的细胞凋亡率分别为16.18%、20.44%、27.12%。5、10、20 μg/mL的CUR在24h对A549-T诱导的细胞凋亡率分别为 7.58%、24.19%、25.06%、5μg/mL(CUR)+1 μg/mL(PTX)、10μg/mL(CUR)+2 μg/mL(PTX)、20 μg/mL(CUR)+4 μg/mL(PTX)对 A549-T 诱导的细胞凋亡率分别为21.02%、28.43%、65.34%。5.CUR-LN 的 AUC(O-t)、MRT、tl/2z、Cmax 分别是 CUR 的 9.55、11.82、5.67、2.84 倍,而 CUR 的清除率(CLz)是 CUR-LN 的 7.33 倍。PTX-LN的 AUC(O-t)、MRT、tl/2z、Cmax 分别是 PTX 的 7.76、12.88、15.67、2.24倍;而PTX的清除率(CLz)是PTX-LN的9.36倍。结论:1.成功建立CUR-LN、PTX-LN的HPLC体外的分析方法,通过薄膜分散法成功制备了 CUR-LN、PTX-LN。2.CUR与PTX不同比例联用后,较单独用药对人肺癌细胞A549有明显的抑制作用;CUR-LN和PTX-LN联合应用较CUR、PTX、CUR-LN、PTX-LN对A549的抑制作用大幅提升;由此提示,CUR-LN与PTX-LN组合对A549细胞有良好的抑制作用。CUR与PTX不同比例联用后较单独用药对细胞人肺癌细胞A549-T有明显的抑制作用,且逆转A549-T细胞对PTX的耐药性;CUR-LN、PTX-LN,较CUR、PTX对A549-T的抑制作用大幅提升;CUR-LN和PTX-LN联合应用较CUR、PTX、CUR-LN、PTX-LN对A549-T的抑制作用大幅提升。说明,CUR-LN与PTX-LN对A549-T细胞有良好的抑制作用,同时逆转A549-T的耐药作用。3.CUR的靶部位在A549的细胞核,CUR的靶部位在A549-T的细胞核及细胞质,PTX的靶部位在A549以及A549-T的细胞质,CUR与PTX联用时靶部位在A549以及A549-T的细胞核与细胞质,且强度增加。4.将CUR与PTX联用后,相比较同浓度的CUR,对A549以及A549-T肿瘤细胞的诱导凋亡能力大幅提升。5.CUR与PTX(1:1,w/w)联合给药,相互间的血浆药代动力学行为互不干扰;CUR-LN与PTX-LN(1:1,w/w)联合给药,二者间的血浆药代动力学行为互不干扰。将CUR与PTX制备成CUR-LN与PTX-LN后,在动物体内的血药浓度增加,半衰期延长,保留时间增加,清除率降低,生物利用度增加。