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脂滴（LDs）是来自内质网的特殊的、复杂的、多功能的细胞器，几乎存在于所有类型的细胞中。随着现代科技的发展，人们对LDs的生化结构、蛋白组学、生理功能、代谢调节和与之相关的疾病有了越来越深入的了解。细胞中有两种分解LDs的途径：一是通过中性脂酶，如甘油三酯脂肪酶（ATGL）和激素敏感酯酶（HSL），来水解LDs中的甘油三酯（TG）和胆固醇酯（CE）等其他脂质；另一方面可以通过自噬来吞噬LDs，然后经自噬溶酶体内的溶解酶来降解其中的脂质。LDs的代谢异常和功能失调与肥胖症、脂肪肝、动脉粥硬化、Ⅱ型糖尿病、炎症和癌症等多种疾病存在着密切关系。子宫颈是连接着子宫体和阴道的重要通道。妊娠期间子宫颈的关闭保证了子宫内胎儿的正常发育。而分娩时子宫颈口的开张为足月胎儿的产出提供了保障。由于子宫颈口的开张和收缩都需要持续的能量供应，而提供能量的来源除糖原颗粒外，是否还由子宫颈上皮细胞中的LDs提供目前均尚不清楚，本研究旨在证明小鼠子宫颈上皮细胞（MCECs）中的LDs在饥饿状态下的能量代谢变化。 首先，采集小鼠子宫颈腔上皮层并进行消化和分离，在DMEM/F12培养液中进行原代培养，利用免疫荧光的方法检测角蛋白的阳性率以证实上皮细胞的纯度，结果显示培养的MCECs纯度>98%，符合实验要求。随后，用Hank’s平衡盐溶液（HBSS）替换DMEM/F12培养液来诱导饥饿，分别对MCECs进行饥饿处理0h、6h、12h和24h。利用荧光追踪法来检测细胞中LDs代谢的变化以及脂肪酸（FAs）在LDs和线粒体之间的转运状态。在饥饿处理前用Bodipy558/568(Red C12)标记FAs，然后开始对细胞进行饥饿处理，处理结束后分别用Bodipy493/503标记LDs和用MitoTracker Green标记线粒体（Mito），在共聚焦显微镜下观察FAs和LDs、FAs和Mito的位置关系。结果表明随着饥饿时间的延长，胞浆中的FAs含量逐渐增多，FA进入到线粒体中。同时，LDs数量增多，LDs变小（p＜0.05）。利用甘油三酯定量检测试剂盒检测饥饿处理后细胞中TG的含量，结果显示TG的量随饥饿时间延长显著减少（p＜0.05）。采用蛋白免疫印记技术检测与LDs代谢相关的酶类如ATGL和HSL、及其上游调控蛋白PKA和AMPK、和自噬标志蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达量变化。结果显示随着饥饿时间的延长，ATGL在6h时有显著上升（p＜0.05），但在24h时显著下降（p＜0.05），HSL和AMPK的表达量从12h时及以后都出现显著的下降（p＜0.05），PKA在饥饿6h时及以后出现显著的下降（p＜0.05），但LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达量只在24h时却显著升高（p＜0.05）。在使用H89（PKA抑制剂）后，结果发现ATGL和HSL表达量下降更加显著（p＜0.05），LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达量从6h时及以后更加显著升高（p＜0.05），而AMPK表达量变化不明显。用发光细胞活力检测试剂盒检测饥饿处理后的细胞中ATP量的变化，结果显示ATP的含量在饥饿6h时开始下降，从12h时及以后呈现显著降低（p＜0.05）。最后用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化，结果表明线粒体膜电位随着饥饿时间延长呈现显著降低（p＜0.05），这意味着Mito受损程度越来越严重。 总之，以上实验结果表明，随着饥饿时间的延长，由于上游调控中性脂酶表达的蛋白AMPK和PKA受到了抑制，ATGL和HSL的表达也受到抑制，PKA激活ATGL和HSL促进LDs的脂解作用减弱。但在这一过程MCECs中LDs内中性脂质仍在被分解，释放到胞浆中的游离FAs增多，同时LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达量在加强，这意味着此时自噬体在LDs分解代谢中发挥主要的作用。过多的FAs进入胞质会产生细胞毒性，造成线粒体膜电位下降，线粒体功能受损，进而导致ATP合成量减少。自噬体不仅参与脂滴的分解代谢，而且还清除FAs过量所引起的损伤细胞器。LDs分解代谢过程中产生的FAs并没有主要用来提供能量ATP。