慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠化生(IM)或异型增生(Dys)是最常见的胃癌前病变,其发展为胃癌的可能性随着异型增生严重程度逐渐增加。由于目前对胃癌尚缺乏行之有效的治疗措施,积极治疗胃癌前病变对防治胃癌十分重要,是目前研究工作的重点。中医药治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变取得了较好的临床疗效,对其发病机理的研究已逐渐深入到分子和基因水平。本研究主要分为文献研究和实验研究两部分。文献研究部分遵循循证医学原则,从文献研究入手,探讨胃癌前病变中医证候分布特点。实验研究部分从基因水平深入探讨以益气化瘀解毒法组方的消痞颗粒治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变可能的分子机制。第一部分文献研究目的：通过对中医辨证治疗PLGC相关文献的整理和分析,总结PLGC的证候分布特点及辨证用药特点,从文献角度探索总结PLGC辨证治疗中的规律性认识,为论文后续研究提供铺垫。方法：检索CBM、CNKI、万方、VIP数据库(1994年-2014年1月),收集慢性萎缩性胃炎癌前病变中医辨证治疗文献,进行整理和计量分析,对证型及用药规律等进行科学性总结。结果：共纳入相关文献38篇,计200条辨证用药数据。常见证型出现频率由高到低依次为脾胃虚弱、肝胃不和、胃阴不足、脾胃湿热、胃络瘀血。本病病机特点为本虚标实,虚实夹杂,本虚为脾胃气虚和/或阴虚,标实为瘀血邪毒。辨证治疗使用药物主要包括健脾、理气、化湿、清热、活血及养阴六类,常用药物(使用频率在10%以上的药物)依次为白术、白芍、茯苓、枳实、半夏、陈皮、香附、黄芪、丹参、柴胡、党参、黄连、当归、麦冬、莪术、厚朴、砂仁、薏苡仁、木香、沙参、佛手、石斛、白花蛇舌草等,体现了中医治疗PLGC常用的治法为益气、养阴、活血、解毒。脾胃虚弱证常用香砂六君汤加减,随病情需要可配伍理气药如香附、陈皮等,活血药如莪术、丹参等,温里药如干姜等。肝胃不和证常用柴胡疏肝散加减,可配伍丹参、当当、郁金、三七、莪术等活血药；茯苓、白术等健脾药；黄连、赤芍、蒲公英、白花蛇舌草等清热药。胃阴不足证常以沙参麦冬汤加减,可配伍茯苓、白术、太子参、党参、山药等健脾药；川楝子、佛手、陈皮、砂仁、香附等理气药；鸡内金、炒谷芽、炒麦芽等消导药。脾胃湿热证常以藿朴夏苓汤加减,配伍枳实、厚朴、陈皮、苏梗、柴胡、香附等理气药；黄连、黄芩、蒲公英、白花蛇舌草等清热药；白术、苍术等健脾药及鸡内金、莪术等消导药、活血药。胃络瘀血证常用失笑散加减,配伍当归、莪术、三七、桃仁、红花等其他活血药,枳实、郁金、木香、川芎、柴胡等理气药,黄芪、白术、党参等健脾药。结论：PLGC病机特点可总结为本虚标实,本虚为脾胃气虚和/或阴虚,标实为瘀血邪毒,故其治法为益气化瘀解毒。辨证治疗本病有一定的规律,常在主方基础上,综合本证型病机特点、药物间相互作用及脾胃生理特性及病理特点,适当佐用其他类药物,使兼顾病机更全面,提高主药疗效。第二部分 实验研究目的：研究益气化瘀解毒法对慢性萎缩性胃炎伴异型增生大鼠甲基化转移酶1(DNMT1)及RUNX3抑癌基因启动子区域CpG岛(CpG island)甲基化的影响,并进一步深入探讨其对细胞周期正性、负性调控因子CyclinD1及P21 WAF1/CIP1的影响。方法：SPF级雄性Wistar大鼠60只,随机分为空白组10只,造模组50只。空白组以清洁级动物标准提供普通饲料和水,造模组予120μg/ml N-甲基N’-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)溶液灌胃为主,每只5ml/kg,1次/24h,并每日自由饮用0.05%氨水溶液、进食含0.03%盐酸雷尼替丁颗粒状饲料,联合建立CAG伴Dys大鼠模型。32周末造模成功后将造模组剩余的33只大鼠随机分为模型组、维酶素组、消痞颗粒组,每组11只,均以清洁级动物标准提供普通饲料和水,模型组予生理盐水灌胃,3mL/kg,1次/24h；维酶素组予维酶素混悬液灌胃,2ml/kg(含维酶素0.3g/kg),1次/24h；消痞颗粒组予消痞颗粒混悬液灌胃,3ml/kg(含生药9g/kg),1次/24h,共持续12周。第44周末将全部大鼠处死。选用光镜观察大鼠胃黏膜病理变化,并采用甲基化特异性PCR (Methylation-specific PCR, MSP)、免疫组化、RT-PCR及Western-blot等技术手段检测各组大鼠抑癌基因RUNX3启动子CpG岛甲基化情况及蛋白表达、DNMT1蛋白的表达以及细胞周期调控因子CyclinD1及P21 WAF1/CIP1 mRNA及蛋白的表达。结果：1实验第26周造模组大鼠胃黏膜出现萎缩,第28周萎缩明显加重,并伴有肠化生,第30、32周在萎缩基础上出现程度不同的Dys。干预结束后,模型组大鼠胃黏膜上皮异型增生程度有所加重；空白组大鼠胃黏膜无明显异常改变。消痞颗粒组及维酶素组大鼠胃黏膜异型增生程度有所减轻,尤以消痞颗粒组变化明显,个别大鼠胃黏膜已接近正常。2空白组、模型组、维酶素组及消痞颗粒组RUNX3基因启动子区甲基化率分别为14.3%(1/7)、100%(7/7)、100%(7/7)和42.9%(3/7),四组甲基化状态比较总体不同或不完全相同(P=0.000<0.01)。进一步经MSP目的条带进行灰度分析显示,消痞颗粒组RUNX3CpG岛甲基化水平低于维酶素组与模型组,与维酶素组比较有差异(P=0.021<0.05),与模型组比较有显著差异(P=0.001<0.01),维酶素组RUNX3CpG岛甲基化水平与模型组比较无统计学差异(P=0.067>0.05)。3空白组、模型组、维酶素组及消痞颗粒组Runx3蛋白表达阳性率分别为10(10/10)、25%(2/8)、44.4%(4/9)和81.8%(9/11),存在明显不同(P=0.001<0.01)。进一步应用IPP6.0软件做半定量分析显示,消痞颗粒组RUNX3蛋白表达水平明显高于维酶素组与模型组,均有显著差异,分别为P=0.008<0.01和P=0.004<0.01,与空白组比较无统计学差异(P=0.324>0.05),维酶素组RUNX3蛋白表达水平与模型组比较无统计学差异(P=0.631>0.05)。4 DNMT1蛋白表达量模型组最高,其次是维酶素组,消痞颗粒组较模型组表达降低,与空白组相接近。各组灰度值比较,模型组和维酶素组与空白组比较均显著升高(P=0.000,0.002,均P<0.01)；消痞颗粒组与模型组及维酶素组比较均降低(P=0.000,0.041,P<0.01及P<0.05)；消痞颗粒组与空白组比较无差异(P=0.137>0.05),维酶素组与模型组比有所降低(P=0.023<0.05)。5 P21 WAF1/CIP1 mRNA表达量模型组和维酶素组与空白组比较均显著降低(P=0.000,0.001,均P<0.01)；消痞颗粒组与模型组和维酶素组比较均增高(P=0.001,0.026,P<0.01及P<0.05)；消痞颗粒组与空白组比较,无统计学差异(P=0.060>0.05)；维酶素组与模型组比较无统计学差异(P=0.088>0.05)。6 P21 WAF1/CIP1蛋白表达量模型组最低,其次是维酶素组,消痞颗粒组较模型组及维酶素组表达增高,与空白组相接近。各组灰度值比较,模型组和维酶素组与空白组比较均显著降低(P=0.000,0.004,均P<0.01)；消痞颗粒组与模型组和维酶素组比较均增高(P=0.002,0.036,P<0.01及P<0.05)；消痞颗粒组与空白组无差异(P=0.260>0.05),维酶素组与模型组比较无统计学差异(P=0.123>0.05)。7 CyclinDlmRNA表达量模型组和维酶素组与空白组比较均升高(P=0.009,0.019,P<0.01及P<0.05)；消痞颗粒组与模型组和维酶素组比较均降低(P=0.006,0.013,P<0.01及P<0.05)；消痞颗粒组与空白组比较,无统计学差异(P=0.850>0.05),维酶素组与模型组比较无统计学差异(P=0.686>0.05)。8 CyclinD1蛋白表达量模型组最高,其次是维酶素组,消痞颗粒组较模型组及维酶素组表达降低,与空白组相接近。各组灰度值比较,模型组和维酶素组与空白组比较均升高(P=0.000,0.014,P<0.01及P<0.05)；消痞颗粒组与模型组和维酶素组比较均降低(P=0.000,0.020,P<0.01及P<0.05)；消痞颗粒组与空白组无差异(P=0.840>0.05),维酶素组与模型组比较有所降低(P=0.042<0.05)。结论：以益气化瘀解毒法组方的消痞颗粒治疗PLGC,防止胃癌发生发展可能的作用机制为：抑制DNMT1表达,从而改善抑癌基因RUNX3启动子区CpG岛高甲基化状态,促进RUNX3表达,进而恢复RUNX3原有的抑癌作用,进一步提高P21 WAF1/CIP1表达,抑制CyclinD1表达,恢复P21-CDK-CyclinD1之间的平衡,使细胞增殖与凋亡恢复正常,从而达到防治胃癌前病变,降低胃癌发病率的目的。