无花果叶黄酮和挥发油同步提取及其活性研究

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无花果(Ficus carica L.)又名映日果,是桑科榕属开花植物,树态优雅,具有良好的观赏价值,果实和叶均可入药,具有健胃清肠、消肿解毒、抗氧化和抗炎抗病毒等作用。目前仅对其果实进行利用,而生物量很大的无花果叶尚没得到有效利用。本文以无花果叶为原料,采用离子液体-超声微波同时蒸馏萃取法(IL-UMASDE)对无花果叶中的黄酮和挥发油成分进行提取,通过响应面法对提取参数进行优化;应用HPLC对提取物中主要黄酮成分进行定量分析;使用GC-MS检测了挥发油的化学成分和相对含量;运用大孔吸附树脂对黄酮进行富集纯化,并通过FRAP、DPPH和ABTS法考察了其抗氧化能力;考察了挥发油成分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和枯草芽孢杆菌这四种菌的抑制活性。主要研究结果如下:1.IL-UMASDE法提取无花果叶中的黄酮和挥发油通过单因素实验和BBD响应面分析,确定了提取的最佳条件:离子液体选用0.35 mol/L的溴化1-丁基三甲基咪唑([C4MIM]Br),液固比30 mL/g,提取时间16 min,微波功率530 W,在此参数下的槲皮素、芦丁、山奈酚、异鼠李素和挥发油的提取率分别为:8.70 mg/g、5.72 mg/g、11.28 mg/g、6.49 mg/g 和 0.32%。2.大孔吸附树脂富集纯化无花果叶黄酮化合物选取了 6种不同极性的大孔树脂(X-5、AB-8、NKA-9、D101、LAS-10、HPD400),通过测定其吸附量和解析率可知,D101、X-5和AB-8三种富集能力较强,选择上述三种树脂进行动态吸附-解吸,计算总黄酮的回收率,确定最佳吸附树脂为AB-8树脂。接下来优化了 AB-8树脂的动态吸附和解吸条件:吸附条件为上样液流速3 BV/h,上样体积为4 BV;解吸条件为80%乙醇为解吸剂,解吸剂流速6 BV/h,解吸剂体积为9 BV。在上述条件下,AB-8树脂对无花果叶总黄酮的回收率为84.55%,无花果叶提取液中四种黄酮(芦丁、槲皮素、山奈酚和异鼠李素)经AB-8树脂富集后,含量为 38.54 mg/g(芦丁)、24.08 mg/g(槲皮素)、47.83 mg/g(山奈酚)和 28.43 mg/g(异鼠李素),分别是未经树脂处理时的4.43、4.21、4.24、4.38倍。3.无花果叶黄酮提取物的抗氧化活性研究FRAP法以FeSO4标准溶液的浓度来表征物质的抗氧化能力,当被测样品浓度为0.3 mg/mL时,各被测物抗氧化能力由大到小依次为:槲皮素(3.64 mg/mL)>山奈酚(3.14 mg/mL)>异鼠李素(2.56 mg/mL)>芦丁(2.14 mg/mL)>无花果叶提取物(1.984 mg/mL)>Vc(1.346 mg/mL)。DPPH法评价抗氧化能力时,无花果叶提取物和四种黄酮清除DPPH自由基的EC50值分别为:槲皮素(0.22 mg/mL)>Vc(0.311 mg/mL)>异鼠李素(0.41 mg/mL)>山奈酚(0.55 mg/mL)>芦丁(0.75 mg/mL)>无花果叶提取物(1.85 mg/mL)。ABTS法评价抗氧化能力时,提取物和四种黄酮清除ABTS自由基的EC50值分别为:芦丁(0.22 mg/mL)>槲皮素(0.24 mg/mL)>异鼠李素(0.31 mg/mL)>山奈酚(0.36 mg/mL)>Vc(0.89 mg/mL)>无花果叶提取物(0.9 mg/mL)。4.无花果叶挥发油的抗菌活性研究实验表明:无花果叶挥发油具有一定的抗菌作用,其对革兰氏阳性菌的抑制作用强于革兰氏阴性菌。无花果叶挥发油对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌的最小抑菌浓度分别为125 μL/L、62.5 μL/L、125 μL/L和250 μL/L。综上所述,本文确立的离子液体-超声微波同时蒸馏萃取法(IL-UMASDE)为无花果叶黄酮与挥发油成分的提取提供了新方法,对提取到的黄酮成分进行富集,并研究了其抗氧化活性,同时研究了挥发油成分的抗菌活性,为无花果叶资源的综合开发利用提供理论基础。
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