LASS2/TMSG-1基因诱导人肺癌细胞发生凋亡的机制研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hgjiao
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目的:研究过表达及沉默LASS2/TMSG-1基因对人肺癌细胞系高转移潜能亚系95D细胞和低转移潜能亚系95C细胞是否发生细胞凋亡及其相关机制。  方法:运用慢病毒转染法将靶向LASS2/TMSG-1基因过表达慢病毒载体(8649)和LASS2/TMSG-1基因沉默慢病毒载体(30011-1)分别转入到95D和95C细胞;采用流式细胞术观察肿瘤细胞的凋亡能力;应用 CCK-8实验法检测肿瘤细胞的体外增殖能力;利用Western Blot检测LASS2/TMSG-1、Bcl-2、Bax、Cytochroem C、Caspase-9、Caspase-3、p-P38MAPK在细胞中的表达水平。统计学分析采用SPSS21.0统计软件,P<0.05认为差别有显著性,有统计学意义。  结果:⑴在95D细胞中,LASS2/TMSG-1过表达组经Western Blot检测细胞内LASS2/TMSG-1蛋白水平明显升高;流式细胞术测定显示LASS2/TMSG-1基因过表达能够促进细胞发生凋亡;CCK-8测定显示LASS2/TMSG-1基因过表达可以抑制细胞增殖;Western Blot分析表明LASS2/TMSG-1基因过表达使Bcl-2的表达减少,诱导Cytochroem C从线粒体释放,促进Caspase-9和Caspase-3的激活和神经酰胺下游效应分子P38MAPK的活化;与正常组和阴性对照组相比有统计学意义(P<0.05)。⑵在95C细胞中,LASS2/TMSG-1沉默组经Western Blot检测细胞内 LASS2/TMSG-1基因蛋白水平明显下降;流式细胞术检测LASS2/TMSG-1基因沉默组细胞的凋亡率明显下降;CCK-8测定显示沉默LASS2/TMSG-1基因能促进细胞增殖;Western Blot分析表明沉默LASS2/TMSG-1基因导致Bcl-2升高,抑制Cytochroem C从线粒体释放,并阻止Caspase-9和Caspase-3的活化和神经酰胺下游效应分子P38MAPK的活化,与正常组和阴性对照组相比有统计学意义(P<0.05)。  结论:LASS2/TMSG-1基因是一个潜在的肿瘤转移抑制基因,可能通过影响Caspase依赖线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡,这可能与LASS2/TMSG-1基因调控V-ATPase(液泡型ATP酶)活性进而影响H+浓度有关;另外,LASS2/TMSG-1可能通过合成神经酰胺,进而激活其下游的效应分子P38MAPK等,启动级联信号通路,将细胞外信息传递到细胞内引起细胞凋亡。
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