CCR4及Treg细胞与变应性鼻炎发病机制相关性的研究

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目的:变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR),是一种分布广泛的、且发病率逐年升高的一种常见的鼻腔变态反应性疾病,是耳鼻咽喉科常见病之一,给患者的生活质量带来了严重的影响,困扰着人们的学习、工作和生活。目前,AR的治疗策略首选是药物治疗,然而根据临床经验及研究显示,药物治疗虽然在大部分患者的短期症状控制上疗效颇佳,但远期效果难以令人满意,且可能出现多种不良反应。现因其发病机制尚不完全明确,无法做到真正的对因治疗。近年来,对AR发病机制研究日益加深,目前研究的热点主要集中在Th1/Th2失衡及Treg/Th17失衡等细胞及细胞因子水平上,已有研究表明,CCR4及Treg细胞对AR的发病有重要影响,但具体作用机制尚不明确。因此,本试验拟通过检测AR患者的外周血中趋化因子受体CCR4、调节性T细胞、CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞等的变化情况,以进一步探讨AR发病机制。方法:选取2019年2月~2019年10月期间就诊于我院耳鼻咽喉-头颈外科门诊的对尘螨过敏的常年性变应性鼻炎患者30例作为试验组,另选取来我院健康查体的健康志愿者30例作为对照组,采集其外周血样本。血样经处理后分别以APC-Cy7标记CD3,FITC标记CD4,BV510标记CD8,BV421标记CD25,BV711标记CD127,PE-Cy7标记CCR4。采用流式细胞分析技术对其外周血中的CD3+T细胞,CD4+T细胞,CD8+T细胞以及CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞以及CCR4+CD4+T细胞的分布情况进行检测,得到二维散点图后使用Flow Jo软件加以分析。首先,根据前向角散射光和侧向角散射光为横纵坐标作二维散点图,以淋巴细胞群设门,然后以APC-Cy7-CD3及前向角散射光为横纵坐标对检测细胞作二维散点图,从淋巴细胞群中设门圈出CD3+T淋巴细胞。再以FITC-CD4同APC-Cy7-CD3为横纵坐标对检测细胞作二维散点图,计算CD4+T细胞在CD3+T细胞中的比例;自CD4+T细胞中分别以BV421-CD25、BV711-CD127为横纵坐标作二维散点图,计算CD4+CD25+CD127low/-在CD4+T细胞中的比例,再以PE-Cy7-CCR4及FITC-CD4为横纵坐标对检测细胞作二维散点图,计算CCR4+T细胞在CD4+T细胞中的比例;最后再以BV510-CD8同APC-Cy7-CD3为横纵坐标对检测细胞作二维散点图,计算CD8+T细胞在CD3+T细胞中的比例。得到的数据使用SPSS20.0统计软件进行分析,试验组及对照组的各类T细胞百分比以均数±标准差(±s)表示。试验组及对照组之间的比较则采用独立样本t检验,当P<0.05即为有统计学差异。结果:与健康志愿者(对照组)相比,AR患者(试验组)外周血中CD3+T细胞占淋巴细胞的比例略降低,但差异无统计学意义(P=0.392);CD3+CD4+T细胞占CD3+T细胞的比例升高,且差异有统计学意义(P=0.008);CD3+CD8+T细胞占CD3+T细胞的比例略降低,但差异无统计学意义(P=0.104);CD4+T/CD8+T的比值升高,且差异有统计学意义(P=0.002);CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞占CD4+T细胞的比例降低,且差异有统计学意义(P=0.004);CCR4+CD4+T细胞占淋巴细胞的比例升高,且差异有统计学意义(P=0.000)。结论:1、在AR的发生过程中,T淋巴细胞总体水平无明显变化,但其亚群的种类和数量有着很大变化,CD4+T细胞增多和CD4+T/CD8+T比例失调可能有着重要作用;2、CD8+T细胞的总量与AR的发病无明显相关性,可能是其细胞功能改变或内部亚群分布失衡所致;3、AR的发生发展与CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞的减少有明显相关性,可能与其免疫抑制功能减弱有关;4、CCR4与Th1/Th2细胞亚群分布比例失衡有密切联系,与AR的发病明显相关,或可作为临床治疗AR的新靶点。
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