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当前干旱胁迫严重的影响了植物的生长发育,利用基因工程技术,从而对植物进行遗传改良,现在已成为提高植物的抗旱性的有效手段。逆境条件能够诱导很多与胁迫相关的转录因子的表达,从而激活其他更多的抗逆相关的基因表达,最终提高植物的抗逆能力。在研究植物的抗逆性相关方面,人们对各类转录因子做了不少的尝试。在转录因子家族,NAC类转录因子是植物转录因子中存在的最大成员之一,其广泛的参与了植物的生长发育过程,并且在盐、干旱等多种非生物胁迫的过程中能够发挥着至关重要的调控作用。对于NAC类转录因子相关的非生物胁迫的研究,大多的集中在水稻、拟南芥、陆地棉及小麦及等草本植物中,然而对于木本植物的相关研究则偏少。前期研究中发现在PEG6000模拟干旱胁迫的转录组应答测序中得到一上调表达的序列标签,可能与干旱胁迫响应相关。本研究通过RT-PCR技术从紫穗槐幼苗中分离到基因的全长cDNA,经过BLAST 比对分析,与鹰嘴豆的NAC52基因高度同源,因此将其命名为AfNAC52基因(GeneBANK登录号MN180266),并且研究了紫穗槐AfNAC52基因的时空表达模式;同时对AfNA C52基因进行生物信息学预测及亚细胞定位;并对AfNAC52基因启动子序列进行分析;检测过表达AfNAC52基因酵母在不同逆境胁迫下生长耐受性变化;构建了原核表达载体GST-AfNAC52蛋白,得到了纯化蛋白;构建植物表达载体,利用烟草进行了异源的超表达研究。结果如下:1.将2个月大的紫穗槐实生苗植株作为试验材料,RT-PCR克隆到AfNAC52基因片段,测序后进行了生物信息学分析预测,发现:AfNAC52基因的ORF区全长为576bp,编码191个氨基酸,蛋白质分子量大小预测为22.04kDa,理论等电点(pI 9.70)。AfNAC52有NAM功能结构域,与鹰嘴豆的亲缘关系最近。蛋白为亲水性的稳定蛋白质,定位于细胞核中。并且AfNAC52基因启动子序列中除含有CAAT-box等基本顺式作用元件外,还具有MEJA反应的调节元件,厌氧诱导所必须的调节元件;生长素响应元件;参与防御和应激反应的顺式作用元件;参与低温响应的顺式作用元件。2.分析了紫穗槐AfNA C52基因在时间和空间中的表达特性,发现:AfNAC52基因在茎、根、花、叶中均有表达,AfNAC52在花中的表达量最高,在根中表达量最低;也分析了在不同肋迫条件下紫穗槐AfNAC52基因在紫穗槐叶片和根中的表达特性,发现:在干旱胁迫下,AfNAC52基因表达量增高,尤其在根中表达量较高;在NaCl胁迫下,AfNAC52基因表达量变化不明显;在NaHCO3胁迫下,AfNAC52基因表达量增高,尤其在根中表达量较高。3.成功构建了 pYES2-AfNAC52酵母表达载体,分析AfNAC52基因酵母在不同逆境胁迫下生长耐受性变化,发现AfNAC52基因酵母在甘露醇和Sorbitol干旱胁迫下,尤其是在含2M和3M甘露醇及2M Sorbitol的YPG培养基上,转入pYES2-AfNAC52酵母菌生长状况明显强于转入pYES2空载体对照酵母菌,表现出较强的耐旱性;在NaHCO3胁迫下,两种酵母菌长势有轻微差别,表现出轻微的耐碱性;在NaCl胁迫下,转入pYES2-AfNAC52酵母菌生长状况与转入pYES2空载体酵母菌没有明显差别。4.成功构建了PGEX-6P-3-AfNAC52原核表达载体,纯化出了 AfNAC52蛋白。5.成功构建了pBI121-AfNAC52-GFP过表达载体,并获得了转基因烟草T3代转基因株系,过表达AfNAC52基因使烟草在干旱胁迫试验中具有更高的存活率,提高了烟草的抗逆性。