Streptococcus thermophilus IMAU20551胞外多糖的结构及其生物合成基因簇的研究

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胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)作为乳酸菌的一种重要的次级代谢产物,具有改善产品质构,提高产品甜度及营养价值等特性,是近年来研究人员追捧的热点。本研究以一株产EPS的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus,S.thermophilus)IMAU20551为研究对象,对其所产EPS的结构、生物活性及基因组信息进行分析,并对EPS合成相关基因在菌株不同生长时期的表达量进行研究。结果如下:(1)从传统发酵乳制品中分离出一株高产胞外多糖的S.thermophilus IMAU20551,采用苯酚-硫酸法测定其在M17培养基中EPS的产量为268.25±5.36mg/m L。采用离子交换柱层析和凝胶分子筛层析对EPS进行分离纯化,共得到2种多糖组分,其中中性多糖(WPS-807)分子量为1.028×10~5Da,主要由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成,并含有少量的鼠李糖和阿拉伯糖,酸性多糖(SPS-807)分子量为8.601×10~4Da,单糖组分相较于WPS-807更为复杂,主要由甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖组成。(2)提取S.thermophilus IMAU20551的DNA,采用illumina Hiseq技术进行二代基因组重测序,并利用SOAPdenovo软件对其进行组装,通过与RAST、COG、GO、KEGG等数据库进行比对分析,注释基因组中的功能基因。发现S.thermophilus IMAU20551基因组全长1725107 bp,共注释得到1884个功能基因,其中包含一个长度为19376 bp的完整eps基因簇,该基因簇中与EPS合成相关的基因共有18个,主要包括epsA、epsB、epsC、epsD、epsE、eps1F、eps2F、epsJ、wzx、epsP和epsX等,这些基因分别调控EPS的合成,组装以及转运输出。(3)利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对不同生长时期S.thermophilus IMAU20551 eps基因簇的表达情况进行分析,发现eps基因簇中的所有基因均可表达,且除个别糖基转移酶基因外,其他被测基因均在菌株生长6 h时表达量达到最大。(4)SPS-807和WPS-807对羟自由基、DPPH自由基以及超氧阴离子的清除能力分析结果表明,这两种纯多糖均具有良好的抗氧化活性和对羟自由基的清除能力,且SPS-807的抗氧化能力要优于WPS-807。
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