【摘 要】
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目的：对老年组和青年组人体肠系膜动脉平滑肌细胞上编码大电导钙激活钾通道BKCa的基因KCNMB1表达水平进行相对定量分析，探讨血管老化过程中大电导钙激活钾通道基因表达变化及其
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目的：对老年组和青年组人体肠系膜动脉平滑肌细胞上编码大电导钙激活钾通道BKCa的基因KCNMB1表达水平进行相对定量分析，探讨血管老化过程中大电导钙激活钾通道基因表达变化及其意义。
方法：(1)研究对象：选取因消化道疾病需行腹部手术的住院患者33例。老年组17例，年龄60～81岁，男9例，女8例，其中胆石症10例，消化性溃疡7例。青年组16例，年龄30～40岁，男8例，女8例，其中胆石症7例，消化性溃疡9例。所有研究对象均无高血压病、冠心病、糖尿病及外周血管硬化性疾病等，术前未使用对血管舒缩功能有影响的药物，术中经探查无肠道血管病变。(2)提取2组人体肠系膜动脉平滑肌细胞的总RNA，经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计测定260nm、280nm的光密度值(OD值)及其比值，判定其纯度。(3)采用MBI公司的RevertAidTMFristStrandcDNASynthesisKit并严格按说明反转录合成第一链cDNA。(4)对反转录产物进行常规PCR，检测目的基因的cDNA片断的质量。(5)荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测目的基因KCNMB1在人体肠系膜动脉平滑肌中的表达。用看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参照对KCNMB1的cDNA起始浓度进行标化，对标化结果进行分析。每个样品的GAPDH和KCNMB1分管同板相同条件下进行扩增反应，每次反应均作空白对照(不加模板)排除污染可能。每个样品重复三次，获得的cDNA相对起始浓度结果取均值。
结果：(1)老年组平均年龄为(71.47±5.05)岁，青年组平均年龄为(32.38±3.67)岁，两组年龄差异有显著性意义(t=-25.303,P=0.00,P＜0.05)；老年组与青年组在性别(χ2=0.029，P=0.866，P＞0.05)及所患消化道疾病类别(χ2=0.75，P=0.387，P＞0.05)方面均差异无显著性。(2)提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳后可见28S、18S、5S3条带，无DNA污染条带和明显降解条带，OD260/OD280均在1.8～2.0之间，说明总RNA纯度较高。(3)常规PCR结果：经1.5％琼脂糖凝胶电泳后可见129bp清晰亮度不同的条带，说明引物设计合成无误，KCNMB1的cDNA模板可用于荧光定量PCR。(4)荧光定量PCR结果：老年组与青年组的KCNMB1/GAPDH定量比值分别为(0.737±0.369)％和(1.169±0.424)％，老年组较青年组降低，两组差异有显著性意义(t=3.133，P=0.004，P＜0.01)。
结论：血管平滑肌上编码钙激活钾通道的基因KCNMB1表达减弱可能是血管老化过程中其舒缩能力下降的重要分子生物学机制。
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