【摘 要】
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目的通过分析过表达sFlt-1子痫前期（PE）模型小鼠与正常妊娠小鼠间胎盘及肾脏组织差异表达基因（DEGs）,筛选DEGs进行功能注释族集分类与信息调控通路分析,分析过表达sFlt-1 PE模型小鼠胎盘及肾脏病理过程中显著改变的基因所涉及的主要功能与信号通路,为探讨PE胎盘及肾脏病理过程中可能的分子基础与调控机制提供循证依据,为PE防治与临床干预提供新的靶点。方法1.sFlt-1过表达PE临床模型
【基金项目】
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国家自然科学基金（81570444）；
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目的通过分析过表达sFlt-1子痫前期（PE）模型小鼠与正常妊娠小鼠间胎盘及肾脏组织差异表达基因（DEGs）,筛选DEGs进行功能注释族集分类与信息调控通路分析,分析过表达sFlt-1 PE模型小鼠胎盘及肾脏病理过程中显著改变的基因所涉及的主要功能与信号通路,为探讨PE胎盘及肾脏病理过程中可能的分子基础与调控机制提供循证依据,为PE防治与临床干预提供新的靶点。方法1.sFlt-1过表达PE临床模型小鼠构建:本研究通过尾静脉注射sFlt-1重组腺病毒（Ad-sFlt-1）构建过表达sFlt-1 PE小鼠模型。将妊娠小鼠分为正常生理盐水对照组（NS 组）及不同 PFUAd-sFlt-1 处理组（1×109、2×109、3×109、4×109）共5组,孕9.5天尾静脉注射NS/1-4×109 PFU Ad-sFlt-1,比较各组sFlt-1血清浓度、血压、尿微量白蛋白/肌酐比值（ACR）以及胎鼠体重等数据,确定构建过表达sFlt-1 PE小鼠模型Ad-sFlt-1最佳注射剂量。2.模型构建实验分组:实验分sFlt-1重组腺病毒组（Ad-sFlt-1）、空载腺病毒对照组（Ad-EGFP）、正常生理盐水对照组（NS）三组,分别尾静脉注射Ad-sFlt-1/Ad-EGFP/NS,比较三组sFlt-1血清浓度、血压、ACR、胎鼠体重以及肾脏病理变化情况。3.sFlt-1过表达PE临床模型小鼠胎盘与肾脏差异基因筛选与功能定位:提取Ad-sFlt-1、Ad-EGFP、NS三组每组3只小鼠的胎盘与肾脏组织RNA行转录组测序,统计胎盘与肾脏样本各组间DEGs,构建基因集,进行GO、KEGG富集分析及PPI网络分析,并选择部分基因进行qRT-PCR验证。结果1.随着尾注剂量的逐步升高,小鼠血压、外周血sFlt-1水平、尿ACR水平也逐渐升高,其中3×109PFU、4×109PFU组与NS组差异显著（P<0.05）,而3×109PFU、4×109PFU两组间无差异（P>0.05）,故确定选择3 ×109PFU Ad-sFlt-1为sFlt-1过表达PE临床模型构建最佳尾静脉注射剂量。2.Ad-sFlt-1组相较另外两组（Ad-EGFP及NS组）,sFlt-1血清浓度、血压、ACR均显著升高（P<0.05）,胎鼠体重显著降低（P<0.05）,肾脏光镜及电镜病理表现出肾小球体积增大、毛细血管管腔狭窄、内皮细胞增生肿胀、部分足突融合等典型的PE肾小球变化。3.胎盘差异基因分析结果显示 sFlt-1过表达PE小鼠模型胎盘共有106个基因显著上调,9个基因显著下调,炎症、免疫、侵袭等机制相关的基因变化显著,GO及KEGG富集分析提示细胞外基质成分交互作用、补体和凝血级联、糖磷脂生物合成等途径意义显著,PPI网络分析筛选出Apoe、Acta2、Epcam等关键基因;Lcn2、Sftpd、Hsd3b1、Acta2、Epcam、Apoe、Tagln、Tnnt2、Cnn1、Myh11 的 qRT-PCR验证结果同测序数据变化趋势一致。4.肾脏差异分析结果显示:sFlt-1过表达PE小鼠模型肾脏共有1 56个基因显著上调,14个基因显著下调,脂代谢障碍、炎症、足细胞损伤等机制相关基因差异显著,GO及KEGG富集分析提示补体及凝血级联、甘油磷脂代谢通路变化明显,PPI网络分析筛选出Fgg、Fgb等关键基因;Pcsk9、Adgrg3、Clcf1、Tia1、Leng8、Kcnc3、Plcd3、Zfp692、Fgg、Fgb 的 qRT-PCR 验证结果同测序数据变化趋势一致。结论1.循环中高水平的sFlt-1可引起孕鼠PE样症状,且在一定范围内,随sFlt-1血清浓度升高,症状加重。3 ×109PFU Ad-sFlt-1可成功建立小鼠sFlt-1过表达PE临床模型。2.sFlt-1过表达可能通过激活细胞外基质成分交互作用、补体和凝血级联、糖磷脂生物合成等途径,启动炎症、免疫、滋养细胞侵袭等机制参与PE临床特征小鼠模型胎盘病理过程。3.sFlt-1过表达可能通过激活补体及凝血级联、甘油磷脂代谢等途径,启动脂代谢障碍、炎症、足细胞损伤等机制参与PE临床特征小鼠模型肾脏病理过程。
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