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目的通过观察坐骨神经夹持损伤模型大鼠(SNI)的脊髓背角上与疼痛相关趋化因子CX3CL1及其受体CX3CR1的蛋白和mRNA以及CCL2的mRNA表达变化,探讨“三法三穴”对坐骨神经损伤大鼠痛觉功能改善的作用机制是否通过与神经损伤痛觉障碍相关趋化因子发挥调节作用。方法74只雄性Sprague-Dawley大鼠,按随机数字表法将大鼠划分为正常组(n=12)、假手术组(n=24)、模型组(n=25)和三法三穴组(n=13)。模型组和三法三穴组采用坐骨神经夹持损伤方法制备实验大鼠模型,假手术组仅暴露坐骨神经。三法三穴组于造模后第7天起用按摩推拿手法模拟仪模拟点法、拨法、揉法三手法对殷门、阳陵泉、承山三个神经-肌肉相关穴位进行干预;正常组、假手术组和模型组采用抓握束缚干预。于造模后7天和干预20天对正常组、假手术组、模型组和三法三穴组进行光热耐痛阈测定;于造模后7天、干预10天和干预20天对假手术组、模型组、三法三穴组进行累积疼痛评分测定。于造模后7天和干预20天进行脊髓背角组织新鲜取材,对脊髓背角CX3CL1及其受体CX3CR1的蛋白和mRNA表达分别进行Western blotting、RT-PCR检测,对CCL2的mRNA进行RT-PCR检测;于干预20天后对模型组和三法三穴组进行多聚甲醛溶液灌注固定取材,对脊髓背角小胶质细胞免疫荧光观察。结果1.三法三穴可以改善SNI大鼠的痛觉功能1.1光热耐痛阈造模后7天,假手术组和模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05),且假手术组和模型组高于正常组,模型组与假手术组比较也有显著差异(P<0.05),且模型组高于假手术组;干预20天后,模型组比正常组和假手术组高,且有统计学差异(P<0.05),三法三穴组高于正常组,但低于模型组,有统计学差异(P<0.05)。1.2累积疼痛评分造模后7天,模型组高于假手术组,有显著差异(P<0.05);干预10天后,模型组评分高于假手术组,有显著差异(P<0.05),三法三穴组评分高于假手术组,有统计学差异(P<0.05),但低于模型组,有显著差异(P<0.05);干预20天,模型组评分高于假手术组,且有显著差异(P<0.05),三法三穴组评分高于假手术组,有显著差异,但低于模型组,有显著差异(P<0.05)。从三个时间点横向来看,模型组呈逐渐上升趋势,三法三穴组呈下降趋势。2.三法三穴对SNI大鼠脊髓背角CX3CL1/CX3CR1、CCL2的表达影响脊髓背角CX3CL1及其受体CX3CR1蛋白和mRNA、CCL2的mRNA的检测结果:2.1 Western blotting造模后7天,各组间CX3CR1蛋白表达没有显著差异(P>0.05);干预20天后,模型组较7天时有明显的上升趋势,但各组间无显著性差异,无统计学意义(P>0.05),三法三穴组低于模型组且接近于正常组和假手术组,但统计学上无显著差异。造模后7天,各组CX3CL1蛋白的表达没有显著差异(P>0.05);干预20天后,假手术组蛋白表达量有下降趋势,模型组有上升趋势,但各组间没有显著性差异(P>0.05),无统计学意义。2.2 RT—PCR造模后7天,与模型组相比,假手术组CX3CR1的mRNA表达高于模型组,但无显著差异(P>0.05);干预20天后,三法三穴组和模型组mRNA表达相比有下降趋势,但无统计学差异(P>0.05)。造模后7天,与模型组相比,假手术组CX3CL1的mRNA表达高于模型组,但无显著差异(P>0.05);干预20天后,三法三穴组和模型组mRNA表达相比有下降趋势,但无统计学差异(P>0.05)。造模后7天,模型组的CCL2的mRNA的表达高于假手术组,无统计学意义(P>0.05);干预20天后,模型组CCL2的mRNA高于假手术组,三法三穴组低于模型组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.脊髓背角小胶质细胞形态观察在荧光显微镜下将患侧脊髓背角放大400倍观察,干预20天的三法三穴组脊髓背角小胶质细胞呈未活化或部分活化,有高分枝状和杆状,胞体较小,突起较长。干预20天的模型组脊髓背角小胶质细胞突起较三法三穴组短,呈完全或部分活化状态,部分胞体增大。结论三法三穴对坐骨神经损伤大鼠痛觉功能有改善作用,但与趋化因子CX3CL1/CX3CR1表达无关,而可能和CCL2有关。三法三穴可以影响脊髓背角的小胶质细胞活化状态。