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目的:1.通过VAS疼痛评分、ISOA评分、中医症候评分,CRP、TNF-α、IL-1β表达量观察评估温经通络方治疗寒凝血瘀型KOA患者临床效果。
2.观察温经通络方对KOA软骨细胞Axin、β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平的影响,探讨温经通络方通过Axin对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用靶向治疗KOA的作用机制。
方法:1.将90例符合纳入标准的KOA患者随机分成治疗组和对照组各45例,治疗组予温经通络方治疗,对照组予美洛昔康片治疗,分别记录每个KOA患者治疗前后的中医症候评分、VAS疼痛评分、ISOA评分,检测CRP、IL-1β、TNF-α表达水平。
2.将70只新西兰大白兔随机分为7组,每组各10只:①正常组;②模型组;③美洛昔康对照组;④氨基葡萄糖对照组;⑤温经低剂量组;⑥温经中剂量组;⑦温经高剂量组。根据木瓜蛋白酶诱导动物膝关节骨关节炎方法进行造模,于实验开始的第1,4,7天膝关节腔内注射4%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.2mL,4周后建立稳定的退行性关节炎的动物模型。从造模开始后第5周对③、④、⑤、⑥、⑦组分别给予相应药物灌胃治疗,空白及模型组生理盐水灌胃治疗,时间为4周,用药28天后处死兔子,然后取兔子软骨材料。Western blot法检测Axin、β-catenin、GSK-3β蛋白表达。
结果:1.温经通络方治疗组在VAS疼痛评分和ISOA评分、中医证候评分方面及降低CRP、IL-1β、TNF-α水平方面较对照组有明显优势(P<0.05),治疗4周内两组患者均未未明显不良反应。
2.Western blot法检测软骨组织中Axin、β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平:模型组软骨组织中的Axin表达水平最低,β-catenin、GSK-3β表达水平最高,治疗组β-catenin、GSK-3β表达水平均高于空白对照组低于模型组,Axin表达水平则相反,治疗组组内比较,β-catenin、GSK-3β表达水平从高到低依次是氨基葡萄糖对照组、中药低剂量组、美洛昔康对照组、中药中剂量组、中药高剂量组,Axin表达水平从高到低依次为中药高剂量组、中药中剂量组、美洛昔康组、中药低剂量组、氨基葡萄糖对照组,Axin表达水平中药中剂量组与中药高剂量组比较无差异性(P=0.916>0.05),其余各结果差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.温经通络方能够改善寒凝血瘀型KOA患者的VAS疼痛评分、ISOA评分、中医症候评分,降低CRP、IL-1β、TNF-α的表达水平。
2.温经通络方可通过Axin对Wnt/β-catenin信号通路进行调控,抑制软骨细胞中β-catenin、GSK-3β蛋白表达。
2.观察温经通络方对KOA软骨细胞Axin、β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平的影响,探讨温经通络方通过Axin对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用靶向治疗KOA的作用机制。
方法:1.将90例符合纳入标准的KOA患者随机分成治疗组和对照组各45例,治疗组予温经通络方治疗,对照组予美洛昔康片治疗,分别记录每个KOA患者治疗前后的中医症候评分、VAS疼痛评分、ISOA评分,检测CRP、IL-1β、TNF-α表达水平。
2.将70只新西兰大白兔随机分为7组,每组各10只:①正常组;②模型组;③美洛昔康对照组;④氨基葡萄糖对照组;⑤温经低剂量组;⑥温经中剂量组;⑦温经高剂量组。根据木瓜蛋白酶诱导动物膝关节骨关节炎方法进行造模,于实验开始的第1,4,7天膝关节腔内注射4%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.2mL,4周后建立稳定的退行性关节炎的动物模型。从造模开始后第5周对③、④、⑤、⑥、⑦组分别给予相应药物灌胃治疗,空白及模型组生理盐水灌胃治疗,时间为4周,用药28天后处死兔子,然后取兔子软骨材料。Western blot法检测Axin、β-catenin、GSK-3β蛋白表达。
结果:1.温经通络方治疗组在VAS疼痛评分和ISOA评分、中医证候评分方面及降低CRP、IL-1β、TNF-α水平方面较对照组有明显优势(P<0.05),治疗4周内两组患者均未未明显不良反应。
2.Western blot法检测软骨组织中Axin、β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平:模型组软骨组织中的Axin表达水平最低,β-catenin、GSK-3β表达水平最高,治疗组β-catenin、GSK-3β表达水平均高于空白对照组低于模型组,Axin表达水平则相反,治疗组组内比较,β-catenin、GSK-3β表达水平从高到低依次是氨基葡萄糖对照组、中药低剂量组、美洛昔康对照组、中药中剂量组、中药高剂量组,Axin表达水平从高到低依次为中药高剂量组、中药中剂量组、美洛昔康组、中药低剂量组、氨基葡萄糖对照组,Axin表达水平中药中剂量组与中药高剂量组比较无差异性(P=0.916>0.05),其余各结果差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.温经通络方能够改善寒凝血瘀型KOA患者的VAS疼痛评分、ISOA评分、中医症候评分,降低CRP、IL-1β、TNF-α的表达水平。
2.温经通络方可通过Axin对Wnt/β-catenin信号通路进行调控,抑制软骨细胞中β-catenin、GSK-3β蛋白表达。