抗菌肽由于其抑菌谱广、抑菌作用明显、不易产生耐药性等特点而逐渐成为一种能够代替抗生素的极具市场前景的抗菌药物。乳酸菌分泌的抗菌肽,具有无毒、无残留、稳定性好、高效等优点,为天然食品防腐剂,已成为当前研究的热点。但是由于乳酸菌抗菌肽产量相对较低,成本较高,未能广泛应用于食品工业。本研究从传统发酵乳制品(马奶酸奶粉和干酪)中分离乳酸菌,旨在从中筛选产抗菌肽的优良菌株,并采用基因工程手段,在大肠杆菌中异源表达,为大量获得乳酸菌抗菌肽提供途径。本研究(1)从传统发酵乳制品(马奶酸奶粉、干酪)中分离获得了79株乳酸菌。以单核李斯特菌为指示菌,从中筛选出8株抑菌效果较好的菌株。采用生理生化鉴定和16S r RNA菌种鉴定,确定其中6株为植物乳杆菌,其余两株为屎肠球菌。(2)采用双层牛津杯法确定上述8株菌株效价,确定了最优菌株1-4和2-2,以其作为实验材料,优化乳酸菌产抗菌肽的条件。结果显示,抗菌肽合成的最佳条件为:培养时间12 h-16 h,培养温度37℃,发酵液原始p H值6-7,菌龄14 h,接种量108 CFU/m L。此条件下,乳酸菌菌体浓度最大,抗菌肽产量最高。(3)根据抗菌肽Plantaricin E、Plantaricin F核苷酸序列设计引物扩增片段,与p Cold-SUMO连接构建重组质粒,并进行诱导表达。诱导表达条件优化实验,最终确定宿主菌为Arctic Express E.coli,诱导时间8 h,诱导温度15℃,IPTG浓度0.2 m M。超声破碎验证目标蛋白在上清液中表达,无包涵体产生,采用非变性条件纯化。与Ni-NTA树脂结合后发现,目标蛋白与杂蛋白完全分开,且浓度较大。p Cold-SUMO-pln E表达的融合蛋白成功切割组氨酸标签,p Cold-SUMO-pln F表达的融合蛋白则未切开。抑菌实验研究发现,与植物乳杆菌菌液对比,两种融合蛋白菌体破碎上清液抑菌效果不明显,融合蛋白纯化后有抑菌圈出现,且酶切his-SUMO-tag标签前后抑菌活性无明显变化。综上,本研究结果表明,抗菌肽Plantaricin E、plantaricin F基因在大肠杆菌中成功表达,表达后的融合蛋白经纯化对单核李斯特菌均有抑菌效果。表达后抗菌肽产量提高,为获得大量抗菌肽提供了途径,将促进乳酸菌抗菌肽的广泛应用。