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研究背景与目的:上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC,卵巢癌),是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,病死率居妇科恶性肿瘤的首位,目前EOC的主要治疗手段为肿瘤细胞减灭术和术后辅助紫杉醇联合铂类化疗6~8个疗程。尽管不断提高手术技能、增加满意的肿瘤细胞减瘤术的比例、运用新的化疗药物及不同治疗方案的组合运用等各种尝试,但仍有80%的患者在初次治疗后复发和转移,导致5年总生存率没有从根本上得到改善。研究发现卵巢癌是一种免疫源性肿瘤,其发生和进展与炎症微环境密切相关,细胞因子在卵巢癌微环境中分泌增多,而发挥免疫抑制作用,促使卵巢癌发生免疫逃逸。国内外许多试验发现白细胞介素6(IL-6)、IL-17A、转化生长因子β1(TGF-β1)水平的增加与卵巢癌的不良预后相关,且TGF-β1可诱导调节性T细胞(Treg),对CD4~+CD25~+Treg功能状态的维持有重要意义,进一步抑制免疫应答。莱菔子素提取于十字花科植物中,大量研究显示,莱菔子素具有抗氧化、抗炎、诱导肿瘤细胞凋亡的作用;可通过直接结合髓样分化蛋白-2中的半胱氨酸133来中断脂多糖(LPS)与TLR4/MD2复合物的结合从而抑制下游信号通路的活化。本试验旨在研究莱菔子素对人卵巢癌细胞表达的IL-6、IL-17A、TGF-β1分泌的影响,及其上清液与外周血T淋巴细胞共培养后对Treg分布变化的影响,以期能改善卵巢癌免疫抑制状态,改善卵巢癌患者预后。研究方法:1.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定莱菔子素(SFN)、紫杉醇(PTX)、脂多糖(LPS)及莱菔子素联合PTX或LPS诱导人卵巢癌细胞OVCAR-3(MyD88~+表达)及A2780(MyD88~-表达)48小时后分泌IL-6、IL-17A、TGF-β1的浓度;2.莱菔子素、紫杉醇(PTX)、脂多糖(PTX)以及莱菔子素联合PTX或LPS诱导人卵巢癌细胞OVCAR-3、A2780 48小时后,分别取其上清液,加入外周血T淋巴细胞共培养24小时,采用流式细胞仪测定各组中Treg的分布变化。实验结果:1.OVCAR-3细胞株能够自分泌IL-6、IL-17A和TGF-β1,它们的含量分别为(109.37±4.03)pg/ml、(76.01±0.18)pg/ml和(1212.54±5.97)pg/ml;A2780细胞几乎不分泌IL-17A、IL-6,分泌一定量TGF-β1,其含量分别为(9.63±3.85)pg/ml、(12.81±1.45)pg/ml、(1033.27±41.42)pg/ml。2.SFN可以减少OVCAR-3细胞分泌IL-6、IL-17A、TGF-β1(P<0.05),而对A2780细胞分泌的IL-6、IL-17A、TGF-β1无影响(P>0.05),脂多糖和紫杉醇可以诱导OVCAR-3细胞分泌IL-6、IL-17A、TGF-β1,而对A2780细胞分泌的IL-6、IL-17A、TGF-β1无明显影响(P>0.05)。SFN可以减少脂多糖、紫杉醇诱导的OVCAR-3细胞分泌IL-6、IL-17A、TGF-β1(P<0.05),而对A2780细胞分泌的IL-6、IL-17A、TGF-β1无明显影响(P>0.05)。3.OVCAR-3细胞上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+表达(10.40±0.10)明显高于正常T细胞组(7.43±0.12),差异有统计学意义(P<0.05);莱菔子素诱导OVCAR-3细胞上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+值(4.43±0.21)低于OVCAR-3细胞上清处理T细胞组(10.40±0.10),差异有统计学意义(P<0.05);LPS诱导OVCAR-3细胞上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+值(11.40±0.56)高于OVCAR-3细胞上清处理T细胞组(10.40±0.10),差异有统计学意义(P<0.05);PTX诱导OVCAR-3细胞上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+值(11.13±0.32)高于OVCAR-3细胞上清处理T细胞组(10.40±0.10),差异有统计学意义(P<0.05);4.莱菔子素联合脂多糖诱导OVCAR-3细胞上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+值(9.23±0.31)低于LPS诱导OVCAR-3细胞上清处理T细胞组(11.40±0.56),差异有统计学意义(P<0.05);莱菔子素联合紫杉醇诱导OVCAR-3细胞上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+值(8.87±0.89)低于PTX诱导OVCAR-3细胞上清处理T细胞组(11.13±0.32),差异有统计学意义(P<0.05);A2780细胞上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+表达(8.87±0.35)明显高于正常T细胞组(7.43±0.12),差异有统计学意义(P<0.05),A2780细胞各组上清处理T细胞组的CD4~+CD25~+Foxp3~+表达无明显差异,没有统计学意义(P>0.05)。结论:1、莱菔子素通过阻断TLR4/MyD88通路,下调OVCAR-3细胞分泌IL-6、IL-17A和TGF-β1,而对A2780细胞无此作用。2、MyD88~+人卵巢癌OVCAR-3细胞培养的上清内,检出IL-6、IL-17A、TGF-β1免疫抑制因子,其上清处理外周血T淋巴细胞后,能够使CD4~+CD25~+Foxp3~+的Treg细胞表达增加,使机体处于免疫抑制的状态;且PTX或LPS作用于OVCAR-3细胞后可进一步促进免疫抑制;而莱菔子素通过阻断TLR-4/MyD88通路,降低MyD88~+人卵巢癌OVCAR-3细胞IL-6、IL-17A、TGF-β1细胞因子的分泌,从而减少CD4~+CD25~+Foxp3~+的Treg细胞表达,改善卵巢癌患者体内的免疫抑制状态。