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研究目的:探索肺腺癌肿瘤细胞球的二次成球能力及分化能力;研究在肺腺癌细胞系的肿瘤干细胞及顺铂耐药肺癌细胞系中Snail蛋白的表达情况。研究方法:1.利用GEO数据库分析SNAI1基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达。2.利用无血清悬浮培养技术,培养肺腺癌A549细胞系肿瘤干细胞球,通过二次成球、诱导分化、免疫荧光检测干细胞标志物CD133、Sca-1等实验证明第二代的肿瘤细胞球具有干细胞特性并可作为肿瘤干细胞模型。3.采用免疫荧光染色方法,检测肺腺癌细胞系肿瘤细胞球中Snail蛋白的表达及肺腺癌A549细胞系、顺铂耐药A549/DDP细胞系中Snail蛋白及干细胞标志物CD133、Sca-1的表达。结果:1.选取GEO数据库中三个非小细胞肺癌细胞系数据,在GDS4296数据库中SNAI1基因在肺腺癌A549细胞系中存在表达;GSE21656数据中顺铂耐药非小细胞肺癌细胞系H460/DDP中SNAI1的表达高于H460细胞系,有统计学意义(P<0.05)。GSE54712数据库中H460细胞系分离的肺癌干细胞中SNAI1基因的表达高于分化细胞。2.利用无血清悬浮培养技术,可培养原代肿瘤细胞球。并通过将培养的原代肿瘤细胞球解离成单个细胞并继续用干细胞培基(SCM)孵育,可得到第二代的肿瘤细胞球,说明原代肿瘤细胞球具有二次成球的能力。将第二代肿瘤细胞球进行诱导分化,培养36小时后可以观察到在培养瓶底部贴壁的细胞,说明培育的第二代肿瘤细胞球具有分化能力。采用免疫荧光染色方法检测肿瘤干细胞球中干细胞标志物CD133和Sca-1在肿瘤细胞球的细胞质中呈强阳性表达。3.免疫荧光染色方结果显示:第二代肿瘤细胞球中Snail蛋白在细胞核中呈阳性表达;Snail在A549细胞系中的阳性表达为5%,A549/DDP中的阳性表达率为15%,有统计学意义(P<0.05)。CD133在A549细胞系中的阳性表达为5.6%,A549/DDP中的阳性表达率为14.7%,有统计学意义(P<0.05)。Sca-1在A549细胞系中的阳性表达为12.6%,A549/DDP中的阳性表达率为15%,无统计学意义(P>0.05)。结论:Snail蛋白在由A549细胞系富集的第二代肺腺癌干细胞球中高表达,且其与顺铂耐药相关。