目的：利用生物学方法制备稳定存在的四种人二磷酸核苷激酶A亚基（NDPK-A）氧化还原异构体，确定造成NDPK-A二硫键异构的关键残基，研究NDPK-A氧化还原异构体在磷酸基转移酶活性、DNase酶活性、抑癌活性上的差异。方法：利用聚合酶链反应（PCR）定点突变技术，对nm23-H1／NDPK-A基因的编码序列基因进行改造，分别将第4，109，145位半胱氨酸突变为丝氨酸，经过测序分析正确后，定向克隆到表达质粒载体pBV220，获得四种突变型NDPK-A基因（pBV-Nm23-H1 C4S；pBV-Nm23-H1 C109S；pBV-Nm23-H1 C145S；pBV-Nm23-H1 CallS）。将突变基因在大肠杆菌DH5a中高效表达。以DEAE-纤维素弱阴离子交换层析、Cibaeron Blue染料亲和层析技术分别纯化四种NDPK-A异构体。采用MALDI-TOF-MS分析各异构体突变位置关键肽段的肽质量指纹图谱；还原型和非还原SDS-PAGE分析异构体电泳行为：HPLC法测定比较异构体磷酸基转移酶活性；体外法测定比较异构体DNA剪切酶（DNase酶）活性差异；并通过细胞外给药途径，利用MTT法初步研究NDPK-A异构体对K562细胞增殖能力的影响。结果：测序鉴定表明已成功构建四种突变型基因，诱导表达蛋白并利用纯化技术获得纯度均达到98％的NDPK-A异构体；质谱分析关键分子量差异从蛋白质水平说明构建结果与预期相符；电泳分析结果显示第145位半胱氨酸是造成NDPK-A二硫键异构的关键残基；HPLC法测定野生型NDPK-A与四种异构体的磷酸基转移酶活性分别为NDPK-A：3558U／mg；C4S：3769 U／mg；C109S：4191 U／mg；C145S：3938 U／mg；CallS：3359U／mgNDPK-A异构体蛋白酶活性关系遵循C109S＞C145S＞C4S＞NDPK-A野生型＞CallS这一规则。体外法评价NDPK-A及其突变体的DNase酶活性，发现C4S异构体的DNA酶活性高于野生型NDPK-A，而C109S、C145S、CallS异构体的DNase酶活性较为接近且比NDPK-A高。MTT结果显示NDPK-A异构体对K562细胞增殖无抑制作用。结论：通过本文研究：（1）成功构建并制备了大量NDPK-A异构体，为NDPK-A结构异构与生物活性关系的后续研究做好了准备。（2）确定NDPK-A二硫键异构的关键残基为第145位半胱氨酸（3）与NDPK-A野生型相比，构建的NDPK-A异构体在磷酸基转移酶活性、DNase酶活性上均得到不同程度增强，并发现NDPK-A C109S和C4S异构体分别在磷酸基转移酶活性和DNase酶活性上分别优于野生型NDPK-A，这对于nm23-H1／NDPK-A活性调控以及基因治疗研究奠定了基础。（4）建立了一套较为合理的评价NDPK-A的DNase酶活性的方法。