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目的:动态观察总tau蛋白及其p-ptauser202在戊四氮点燃癫痫模型中海马CAl、CA3、DG及H区的表达变化,探讨其在癫痫轴突出芽发生发展中的作用。
方法:清洁级SD雄性成年大鼠180只,随机分为对照组(90只)与造模组(90只)。分别随机再次分为3d、1w、2w、4w、6w五个时间点。在相应时间点:对照组SD大鼠腹腔注射生理盐水,造模组SD大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)制备点燃动物模型,应用Timm染色观察苔藓纤维出芽,免疫组化技术和Western b10tting检测各时间点总tau蛋白及其磷酸化的蛋白p-ptauser202在海马CAl、CA3、DG及H区的表达情况。
结果:
1.动物模型
大鼠多在连续注射PTZ 22~27天后被点燃,平均25.2±1.5天。模型点燃率为94.4%,死亡率为3.1%。达到点燃标准的大鼠,可见自发发作及脑电图痫性波,再次予相同阈下剂量PTZ刺激仍可诱发痫性发作和脑电图痫性波;对照组未出现诱发发作及自发发作,脑电图亦无痫性波。
2.Timm染色
造模组各时间点CA3区苔藓纤维出芽明显增多,DG区内分子层苔藓纤维出芽无明显改变。
3.总tau蛋白的表达
对照组大鼠的tau蛋白主要分布于海马CAl、CA3、DG和H区神经元的轴突,造模组大鼠胞浆中表达似有增多。
造模组大鼠:海马CAl、CA3、DG区总tau蛋白均在第3天就出现表达增多,第4周达高峰,第6周表达明显减少,但未达正常水平;H区tau蛋白的表达明显增多,但是各个时间点之间总tau蛋白的表达无明显差异。
4.p-ptauser202的表达
P-ptauser202与总tau蛋白在海马各区的表达基本一致。造模第3天H区p-psertau202的表达明显增多,与对照组比较有显著性;造模第1周CAl区、CA3区p-ptauser202蛋白的表达明显增多,与对照组比较有显著性:CAl区0.05),CA3区;造模第2周DG区p-ptauser202蛋白的表达明显增多,与对照组比较有显著性;其中CAl、CA3及H区第四周左右达到高峰,DG区在第2周即达到高峰,之后都均降低,但均未降到正常水平。
结论:
1.tau蛋白可能与点燃大鼠的轴突出芽有关,在癫痫的发生和发展 中起了重要的作用。
2.tau蛋白可能通过其磷酸化水平的增高参与了轴突出芽。