申嗪霉素氨基酸耦合物在植物体内的穿透性研究

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申嗪霉素是一种微生物源杀菌剂,对多种植物病原菌有很好的抑菌活性,低毒且与环境相容性好。但是不能通过喷雾使用防治土传病害,因为申嗪霉素在韧皮部没有传导性,不能通过喷施到达植物根部。本课题组为了改善申嗪霉素的韧皮部传导性,将氨基酸与其耦合,得到一系列申嗪霉素-氨基酸耦合物。其中,申嗪霉素-L-缬氨酸的蓖麻韧皮部传导性最好,其他大多数申嗪霉素-氨基酸耦合物均有韧皮部传导性。但这些申嗪霉素-氨基酸耦合物进入植株体内时,受到哪些因素的影响尚未进行研究。本文分别以蓖麻叶片、蓖麻细胞和蓖麻原生质体为试验材料,研究了申嗪霉素-氨基酸耦合物进入植物体内的方式及主要的影响因素。本文先通过摇瓶法测定了申嗪霉素及其氨基酸耦合物的油水分配系数,结果表明,实际测定值与文献报道的计算值有较大的差别,根据Kleier模型的预测,申嗪霉素-氨基酸耦合物应该都具有中等程度的韧皮部传导性,根据本实验室前期试验,发现申嗪霉素-氨基酸耦合物的韧皮部输导性并不符合该模型。所以推测申嗪霉素-氨基酸耦合物在进入蓖麻内部时受到其他因素影响。通过蓖麻叶片中申嗪霉素-氨基酸耦合物的吸收含量,判断申嗪霉素进入叶片,在申嗪霉素-氨基酸耦合物最初接触、开始进入蓖麻细胞内时是否受到影响。通过液-液萃取的方法,使用液相色谱与质谱联用仪检测申嗪霉素-氨基酸耦合物在蓖麻叶片的吸收量。结果表明:在10 min、20 min、30 min、40 min、60 min、120 min这6个时间点,申嗪霉素的吸收量随着时间增加而增加,申嗪霉素-L-缬氨酸耦合物和申嗪霉素-L-苯丙氨酸耦合物的吸收量,随着时间增加先增加后减少,再增加。申嗪霉素-L-天冬酰胺耦合物的吸收量,随着时间增加而增加,增加的幅度较小。申嗪霉素-D-缬氨酸耦合物的吸收量,随着时间的增加,先缓慢地增加而后快速增加,之后减少。通过对蓖麻细胞和原生质体的吸收量的检测,建立了一种液相检测方法。在蓖麻原生质体的试验中,在0.5 min到10 min,随着时间的增加,申嗪霉素在蓖麻原生质体内的吸收量减少。申嗪霉素-L-缬氨酸耦合物的吸收量,随着时间的增加,先增加,后降低然后基本平衡不变。申嗪霉素-D-缬氨酸耦合物的吸收量,随着时间增加先增加,后降低,在相同条件下,申嗪霉素-L-缬氨酸的吸收量要高于申嗪霉素-D-缬氨酸。申嗪霉素-L-苯丙氨酸在1.5 min时有吸收量有显著性增高,在2 min时吸收量最大,2.5 min开始,有显著性降低。申嗪霉素-L-天冬酰胺在原生质体内的吸收量在2 min是有显著性的升高,在2.5 min开始降低。在原生质体吸收试验中加入CCCP解偶联剂,蓖麻原生质体中申嗪霉素-L-缬氨酸耦合物的吸收量有明显的减少,说明申嗪霉素-L-缬氨酸进入蓖麻原生质体内是一个需要能量的过程,其进入蓖麻原生质体的方式包括主动运输。上述结果表明,申嗪霉素-氨基酸耦合物进入蓖麻体内是一个复杂的过程,除了受到其本身理化性质的影响外,还存在主动吸收的成分。特别是对于能在蓖麻韧皮部传导的申嗪霉素-氨基酸耦合物,在供试药剂与蓖麻植株接触初期,表现为初期含量迅速增加,并且当加入解偶联剂时,吸收量又显著下降,说明蓖麻细胞上的转运载体参与了吸收,是一个主动吸收的过程。但由于载体的转运量有一定的限制,当外源申嗪霉素-氨基酸耦合物浓度和时间增加时,被动扩散成为主要的吸收方式。因此申嗪霉素-氨基酸耦合物在蓖麻上的吸收是一个既有主动吸收又有被动扩散的过程,同时受到多种因素的影响。
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