格尔德霉素及美登木素的生物合成研究——格尔德霉素生物合成后修饰基因的功能鉴定和美登木素生物合成的植物内生菌起源初步研究

来源 :中国科学院昆明植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:buffon149
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本论文由三部分组成,第一部分关于格尔德霉素生物合成途径中后修饰基因的功能鉴定,包括1) 实现在野生型格尔德霉素产生菌中将依赖FAD的单加氧酶基因gel7和氨甲酰基转移酶基因gel8同时敲除获得格尔德霉素前体,验证了ge18编码氨甲酰基转移酶在 C-7 位引入氨甲酰基;表明格尔德霉素中 C-4、C-5 之间的不饱和双键是在后修饰反应过程中形成;.gel7 与后修饰过程中的氧化反应相关.2) 为验证gel7基因功能进行的基因回补及异位表达实验,没有检测到预期产物,说明格尔德霉素前体的氧化过程可能并非一步完成,或者不仅仅是由gel7独立完成.3) 细胞色素P450氧化酶基因gel16的回补实验结果验证了gel16负责格尔德霉素 C-4,C-5 位的双键形成.4) 利用安丝菌素合成后修过程中 N-甲基转移酶基因 asm10 和卤化酶基因 asm12 的异位表达实现了对格尔德霉素产生菌突变体产物进行结构修饰. 论文第二部分,为验证"美登木素生物合成的植物内生菌起源"的推想,作者从滑桃树不同组织分离得到内生放线菌约160余株,对其中27个菌株做了16SrDNA鉴定,有一株:Br2y-1与"未培养细菌"同源性为96﹪;针对美登木素活性及结构特征对内生菌发酵产物进行了抗真菌活性、薄层层析及 LC-ESI-MS 检测,有10株内生菌三种检测均呈阳性;从基因水平以PCR检测根据形态分组的28个代表菌株,有4株具有AHBA合酶基因,其中一株M27m3同时具有氨甲酰基转移酶基因,可能具有合成美登木素类化合物的潜能.对菌株产物进行的抗人体病原菌活性检测结果显示:75﹪具有抗金黄色葡萄球菌活性,约19﹪具有抗结核分支杆菌活性,约18﹪具有抗白色念珠菌活性,并且部分菌株具有2种或2种以上抗菌活性.有10株内生菌对 P-388 小鼠白血病及 A-549 人肺癌细胞具有抗肿瘤活性;并且从两个菌株发酵产物中分别分离得到一个新的吡唑类生物碱和一个新的红霉素结构类似物,说明滑桃树内生放线菌是活性和新物质的巨大资源. 在第三部分中作者对聚酮类抗生素生物合成研究进展做了文献综述.
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