七氟烷对宫颈癌顺铂化疗敏感性的影响及其机制的研究

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本文以下通过几个方面进行:
  第一部分 七氟烷及其联合顺铂对宫颈癌细胞生物学行为的影响
  目的:探讨七氟烷及其联合顺铂对宫颈癌细胞生物学行为的影响。
  方法:选取宫颈鳞癌细胞(SiHa)和宫颈腺癌细胞(HeLa),传代培养,然后根据宫颈癌细胞顺铂的IC50值选取10μM为顺铂作用浓度。按照七氟烷和顺铂的作用浓度将所有细胞分为八组:0(对照组)、1%七氟烷组、2%七氟烷组、3%七氟烷组、10μM顺铂组、1%七氟烷组+10μM顺铂组、2%七氟烷组+10μM顺铂组、3%七氟烷组+10μM顺铂组,将10μM顺铂的培养基加入相应组别的细胞培养皿中后,所有细胞立即暴露于不同浓度(0、1%、2%、3%)的七氟烷中2h,继续培养24h,后采用CCK-8法检测细胞在450nm波长处的吸光度(OD)值,并且计算细胞存活率,使用伤口愈合法检测细胞迁移面积,并计算细胞迁移率。
  结果:(1)不同浓度的七氟烷作用SiHa和HeLa细胞后,细胞活力均明显增加,且增加方式呈药物浓度依赖性,细胞存活率也相应增加,差异有统计学意义,(P<0.05);但与单独使用顺铂相比,不同浓度七氟烷与顺铂的联合作用并未对SiHa和HeLa细胞的细胞活力与细胞存活率产生影响,差异无统计学意义,(P>0.05);(2)2%,3%七氟烷作用于SiHa和HeLa细胞后,细胞迁移面积明显增加,且随着药物浓度增加,差异有统计学意义,(P<0.05);但1%七氟烷对宫颈癌细胞的迁移面积无影响(P>0.05)。与顺铂单独作用细胞相比,不同浓度的七氟烷与顺铂的联合作用并未改变SiHa和HeLa细胞的细胞迁移面积,差异无统计学意义,(P>0.05)。
  结论:七氟烷呈浓度依赖式促进宫颈癌细胞的增殖和迁移,但是当其与顺铂联合使用时,并不影响顺铂对宫颈癌细胞增殖和迁移的抑制作用,即表明七氟烷不影响宫颈癌细胞顺铂化疗敏感性相关的生物学行为。
  第二部分 七氟烷及其联合顺铂对宫颈癌细胞生物学行为影响相关蛋白的研究
  目的:七氟烷及其联合顺铂对宫颈癌细胞生物学行为影响相关蛋白的研究。
  方法:选取宫颈鳞癌细胞(SiHa)和宫颈腺癌细胞(HeLa),传代培养,然后将每种细胞分为四组:0(对照组)、3%七氟烷、10μM顺铂组、3%七氟烷+10μM顺铂组。将10μM顺铂的培养基加入相应组别的细胞培养皿中后,立即将所有细胞暴露于不同浓度(0、3%)的七氟烷中2h,后继续培养24h,后采用蛋白免疫印迹法分别检测增殖相关蛋白PCNA、侵袭和迁移相关蛋白MMP2,Ezrin、耐药相关蛋白MRP1,LRP,P-gp和GST-π等的表达。
  结果:(1)经蛋白免疫印迹检测后,发现七氟烷增加了SiHa和HeLa细胞中增殖相关PCNA蛋白的表达,差异有统计学意义,(P<0.05);但与顺铂组相比,七氟烷与顺铂的联合使用并未改变对SiHa和HeLa细胞中PCNA蛋白的表达,差异无统计学意义,(P>0.05);(2)七氟烷增加了SiHa和HeLa细胞中侵袭、迁移相关蛋白MMP2和Ezrin的表达,差异有统计学意义,(P<0.05);但与顺铂单独作用相比,七氟烷与顺铂的联合使用并未改变对SiHa和HeLa细胞中MMP2和Ezrin蛋白的表达,差异无统计学意义,(P>0.05);(3)七氟烷对SiHa和HeLa细胞中顺铂耐药相关蛋白MRP1,LRP,P-gp和GST-π的表达均无影响,差异无统计学意义,(P>0.05);同时与顺铂单独作用相比,七氟烷与顺铂的联合使用并未改变对SiHa和HeLa细胞中MRP1,LRP,P-gp和GST-π的表达,差异无统计学意义,(P>0.05);
  结论:七氟烷可通过上调增殖,侵袭、迁移蛋白PCNA,MMP2和Ezrin表达而促进宫颈癌细胞的增殖和侵袭、迁移;但是与顺铂联合使用时,七氟烷不影响顺铂对PCNA,MMP2以及Ezrin蛋白的下调作用,即七氟烷不影响顺铂对宫颈癌细胞增殖,侵袭、迁移的抑制作用。七氟烷对宫颈癌细胞中耐药蛋白MRP1,LRP,P-gp和GST-π的表达无影响,且与顺铂联合使用后,不影响顺铂对癌细胞中耐药相关蛋白表达的调控。通过对细胞增殖,侵袭、迁移以及耐药相关蛋白表达的检测,进一步证实了七氟烷的对宫颈癌细胞顺铂化疗敏感性无影响。
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