[目的]肿瘤细胞的神经浸润是肿瘤转移、复发的重要因素之一;发生神经浸润的肿瘤细胞其形态会向神经胶质细胞转变并表达神经胶质细胞相关蛋白。施旺细胞是一种神经胶质细胞,其分泌的各种神经营养因子可以促进肿瘤细胞神经浸润的进展。MK在结直肠癌中的高表达目前已被证明与结直肠的侵袭、转移、耐药密切相关。高表达MK的肠癌细胞可以使肠癌细胞具备干细胞特性。有研究表明,施旺细胞、MK共同作用可以激活BDNF/TrkB信号通路。在唾液腺癌中,BDNF/TrkB信号通路的激活可以促进其向神经胶质细胞分化,最终导致神经浸润的发生。本研究旨在探讨施旺细胞、BDNF、MK与神经胶质干细胞分化之间的关系,从而为结直肠神经浸润的发生机制提供新的理论依据。[方法]1.构建过表达MK的慢病毒重组质粒;鉴定通过后对过表达慢病毒重组质粒进行慢病毒包装并进行转染;筛选过表达MK的稳转肠癌细胞株;鉴定过表达MK的稳转肠癌细胞株;2.Western blot、免疫荧光染色法等方法,检测过表达MK的肠癌细胞株上皮和间质标志蛋白和干性标志相关蛋白的表达情况;3.研究施旺细胞或BDNF对过表达MK的肠癌细胞株形态学影响;对神经标志物TrkB和GFAP表达的影响。[结 果]1.测序验证重组克隆中插入MK片段序列与目的片段序列完全一致,MK过表达质粒构建成功;2.构建过表达MK的质粒并包装到慢病毒PGMLV-6751;稳定转染肠癌细胞株;筛选鉴定出过表达MK的稳转细胞株;3.①检测过表达MK的稳转第六代肠癌细胞株上皮和间质标志蛋白及干性蛋白:E-cadherin在MK过表达第六代细胞株表达量明显低于对照细胞株,差异有统计学意义(P<0.05),vimentin、CD44在MK过表达第六代细胞株表达量明显高于对照细胞株,差异有统计学意义(P<0.05);②免疫荧光结果:上皮标志物E-cadherin在MK过表达第六代细胞株荧光强度明显低于对照稳定细胞株,间质标志物vimentin在MK过表达第六代细胞株荧光强度明显高于对照稳定细胞株。结果提示过表达MK的稳转肠癌细胞有上皮-间质转化和干细胞转化的趋势;4.过表达MK肠癌第六代细胞株与施旺细胞或BDNF共培养,镜下观察发现,过表达MK肠癌细胞形态向梭形细胞转变,细胞有多个伪足伸出,提示肠癌细胞有向神经胶质细胞分化的现象。检测神经标志物TrkB、GFAP的表达量发现,对照稳定细胞株