【摘 要】
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第一部分Tg-JAZF1小鼠的构建与鉴定目的:构建JAZF1转基因动物模型,为深入研究JAZF1基因功能奠定基础方法:体外扩增JAZF1基因CDS区序列,插入pIRES2-EGFP质粒中,经酶切线性化质粒,将
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第一部分Tg-JAZF1小鼠的构建与鉴定目的:构建JAZF1转基因动物模型,为深入研究JAZF1基因功能奠定基础方法:体外扩增JAZF1基因CDS区序列,插入pIRES2-EGFP质粒中,经酶切线性化质粒,将含有启动子,JAZF1,标签,多聚腺苷酸尾的线性序列经显微注射到受精卵中,将受精卵移植入受体小鼠,产出小鼠之后利用PCR,Southern杂交鉴定DNA序列得到Founder小鼠。将Founder小鼠与C57小鼠进行杂交获得F1代小鼠。经孟德尔遗传定律繁育获得较纯的转基因鼠,利用RT-PCR和Western blot等方法鉴定转基因鼠JAZF1的表达。结果:转基因鼠JAZF1的mRNA和蛋白在肝脏、肌肉、脂肪组织中表达较野生鼠均显著升高(P<0.01)。结论:成功构建JAZF1转基因动物模型,可以用于后续研究。第二部分JAZF1过表达对糖异生及胰岛素信号通路的影响目的:探讨JAZF1基因过表达对糖异生及胰岛素信号通路的影响。方法:将8周龄Tg-JAZF1小鼠和WT小鼠分别随机分为两组:普食喂养组(SD,n=6)和高脂喂养组(HFD,n=6)。各组小鼠喂养12周之后测定肝脏组织糖异生关键基因G-6pase和PEPCK的mRNA和蛋白表达的变化;western blot测定肝脏、肌肉、脂肪组织胰岛素信号通路蛋白磷酸化水平变化。结果:与WT对照组小鼠比较,转基因组肝脏磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)在普食喂养和高脂喂养条件下mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);肝脏、肌肉、脂肪组织胰岛素信号通路蛋白磷酸化水平均增加(P<0.01)。结论:JAZF1过表达能抑制肝脏糖异生关键基因表达,增加肝脏,肌肉,脂肪组织的胰岛素敏感性。
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