研究背景乙型肝炎严重威胁人类健康,目前仍缺乏有效、安全治疗乙肝的药物。多成分、多靶点的中药,在护肝保肝方面的临床效果得到广泛的认可。护肝抗原丸是由12味中药组成的院内制剂,具护肝抑酶,清除乙肝病毒功效。该丸剂是方中药味直接打粉入药,导致服用剂量大（6g/次,3次/日）的问题,基于护肝抗原丸的中药新药--护肝抗原胶囊研究开发,具有非常重要的社会效益和经济效益。在中药的研发过程中,质量评价和药物代谢动力学研究是两大关键环节,前者为用药安全、有效提供保障,而后者则通过阐明药物体内命运,为药理作用的发挥提供物质基础的支撑。目前,中药质量评价仍参照化学药品的质控模式,虽然该评价模式在某些方面发挥了积极的作用,但是对含复杂成分的中药来说,直接以中药含有的一到几个指标成分的含量高低进行评价,存在质量与疗效不相关的问题;基于绝大部分口服药物只有通过吸收,方能发挥作用的认识,认为基于吸收为前提的中药质量评价模式则更有价值。中药药动学研究,通常通过与其功能主治相关、并有明确药理作用成分的药动学特征,阐明中药的体内过程,血药浓度法是药动学研究的经典方法。因此拟采用血药浓度法探索护肝抗原胶囊的药动学特征。另外,基于中药制剂成分复杂且入血后含量低的现状,选择具有高灵敏度和选择性的液相色谱-质谱联用技术,对各成分体内不同时间点的浓度进行定量测定。研究目的中药制剂作为巨物质体系,探索其质量与其疗效相关的评价模式,是中药现代化的关键环节。本文以护肝抗原胶囊为例,建立一种基于吸收的质量分析模式,用于复杂中药制剂质量分析与评价。药物代谢动力学通过数学模型,可阐明药物体内过程。中药制剂药物代谢动力学特征的研究,关键是特征成分的选择。黄芩中汉黄芩素和千层纸素A,五味子中五味子醇甲,牡丹皮中芍药苷及虎杖中大黄素均为确认的抗炎活性成分,拟通过这5个活性成分的体内过程,评价护肝抗原胶囊的体内药动学特征。研究方法1.采用超快速高效液相色谱-四级飞行时间质谱对护肝抗原胶囊提取物及口服护肝抗原胶囊后的大鼠血清所含成分进行快速的分离与鉴定。2.采用HPLC-DAD定量分析护肝抗原胶囊中黄芩素、汉黄芩素、丹皮酚和大黄素的含量。3.大鼠灌胃护肝抗原胶囊提取物溶液,于给药后特定的时间点采集全血并分取血清。采用所建立的HPLC-MS/MS分析方法测定大鼠血清中五味子醇甲、汉黄芩素、千层纸素A、大黄素和芍药苷5种成分的含量,绘制各成分的药时曲线并采用DAS 3.2.2药动学软件以非房室模型计算各成分药代动力学参数。研究结果1.依据对照品保留时间、特征碎片离子、质谱裂解规律等质谱信息及参考文献,在护肝抗原胶囊提取物中共确证和指认包括黄酮类,有机酸类,苯丙素类,蒽醌类,皂苷类,生物碱类等107种成分,在口服护肝抗原胶囊后的大鼠血清中找到其中的43种原型成分。2.建立了 HPLC-DAD同时测定护肝抗原胶囊中黄芩素,汉黄芩素,丹皮酚与大黄素含量的定量分析方法。3.建立了同时测定大鼠血清中五味子醇甲、汉黄芩素、千层纸素A、大黄素和芍药苷的HPLC-MS/MS定量分析方法。所建立的方法符合FDA关于生物样品定量分析方法建立的技术要求,适用于护肝抗原胶囊血浆药动学特征的定量研究。药动学结果表明,五味子醇甲、大黄素与芍药苷在雄性与雌性大鼠体内药动学曲线特征均不一致,而且,用所建立的方法不能检测到雄性大鼠血清中的五味子醇甲,提示五味子醇甲具有性别依赖性。汉黄芩素和千层纸素A的末端消除半衰期（t1/2）比文献所报道的有所延长。研究结论1.建立了一种以吸收为前提的中药质量评价模式,并在该模式下成功挑选出四种指标成分,用于护肝抗原胶囊质量评价中。2.本研究用HPLC-MS/MS建立了一个正负模式同时扫描、简单快速的测定五个化合物定量分析方法,并成功用于口服护肝抗原胶囊后大鼠血清中五种成分的药代动力学研究,所得药动学特征与报道的参考文献略有不同,可能由12种药物之间的配伍作用所引起的。