【摘 要】
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目的:探讨中草药化合物毛蕊花糖苷对肝癌细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。方法:将不同浓度(0μM,40μM,60μM,80μM,100μM,120μM)的毛蕊花糖苷加入人肝癌HepG2细胞,分别作用24小时、48小时和72小时,在倒置显微镜下观察毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞形态学的影响,CCK8法检测毛蕊花糖苷对肝癌细胞增殖的影响,并确定下一步的药物浓度和作用时间。细胞划痕实验检测毛蕊花糖苷对
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目的:探讨中草药化合物毛蕊花糖苷对肝癌细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。方法:将不同浓度(0μM,40μM,60μM,80μM,100μM,120μM)的毛蕊花糖苷加入人肝癌HepG2细胞,分别作用24小时、48小时和72小时,在倒置显微镜下观察毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞形态学的影响,CCK8法检测毛蕊花糖苷对肝癌细胞增殖的影响,并确定下一步的药物浓度和作用时间。细胞划痕实验检测毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞运动能力的影响,Transwell小室实验检测毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞侵袭及迁移的影响,Western Blot检测毛蕊花糖苷对ERK5、p-ERK5以及基质金属蛋白酶MMP-9、MMP-2表达的影响。结果:1.细胞形态学变化:随着毛蕊花糖苷浓度的递增,人肝癌HepG2细胞的数量明显减少,形态逐渐变圆,贴壁性变差,可看见增多的漂浮坏死细胞,细胞间的连接稀疏,边界模糊不清,还可看到一些形态不完整细胞。2.CCK-8结果:随着毛蕊花糖苷浓度的增加和时间的延长,人肝癌HepG2细胞的活性逐渐降低,增殖能力受到不同程度的抑制,并呈现一定的浓度、时间依耐性。IC50约为98μM,故后续实验药物浓度组选择为80μM、100μM。3.细胞划痕结果:与空白对照组相比,实验组(80μM,100μM)能够抑制人肝癌HepG2细胞的运动能力(P<0.01)。与阳性对照组相比,80μM组具有统计学差异(P<0.05),100μM组无统计学差异(p>0.05)。4.Transwell小室结果:a.对迁移的影响:空白对照组、实验组(80μM,100μM)和阳性对照组的细胞迁移个数分别为435.80±32.13个、241.07±23.64个、150.50±6.04、99.82±9.01个。与空白对照组相比,实验组穿过小室的肝癌细胞数目明显减少(P<0.01),与阳性对照组相比,80μM组具有差异性(P<0.05),100μM组无明显变化(p>0.05);b.对侵袭的影响:空白对照组、实验组(80μM,100μM)和阳性对照组的细胞侵袭数目分别为419.80±19.1个、211.07±15.64个、103.2±16.04、以及88.50±11.5个。其中,与空白对照组相比,实验组穿过小室膜的能力明显减弱(P<0.01),与阳性对照组相比,80μM组具有差异性(P<0.05),100μM组比较无明显变化(p>0.05)。5.Western Blot结果:与空白对照组相比,实验组p-ERK5、MMP-9(P<0.01)及MMP-2(P<0.05)的表达明显降低,与阳性对照组相比,80μM组具有统计学意义(P<0.05),100μM组无统计学差异(P>0.05)。ERK5蛋白表达,各组间相比无明显变化(P>0.05)。结论:1.毛蕊花糖苷能够抑制肝癌细胞的增殖、侵袭及其迁移。2.毛蕊花糖苷可通过ERK5信号通路抑制肝癌细胞的侵袭及迁移。
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