差异表达的ANXA10对人原发性肝癌细胞株(HepG2)基因表达谱影响的研究

被引量 : 0次 | 上传用户:wyman_wmw
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:1、构建人ANXA10过表达慢病毒并转染人肝癌细胞株HepG2。2、检测ANXA10过表达慢病毒对人肝癌细胞株HepG2基因表达谱的影响,初步阐明ANXA10在原发性肝癌发生和发展中的基因调控作用,为原发性肝癌发生发展中的关键基因及其信号转导途径研究打下基础,为肝癌基因治疗寻找新的途径和理想的靶点。方法:1、体外实验,构建携带GFP过表达慢病毒ANXA10,并将过表达慢病毒ANXA10以MOI=10转染人肝癌细胞株HepG2,分成实验组(LV-ANXA10组)和空白对照组。过表达慢病毒ANXA10的转染效率的确定是采用在荧光显微镜观察GFP表达,采用Illumina-Solexa测序比较两组细胞基因表达谱的差异,并采用qPCR验证相关的部分差异基因。2、体内实验,用胰酶消化处于对数期生长的HepG2细胞,制成单细胞悬液,取200ulHepG2细胞悬液(1×10~7个/ml)接种于裸鼠右侧腋下。于接种后1周左右开始成瘤,第24天时瘤体直径约1-2cm大小,采用拖颈方式处死裸鼠并取出瘤体,剪成1mm3大小,分别接种至16只雌性裸鼠(6-8周龄)右侧腋窝皮下,1周后瘤体直径约0.3-0.5cm大小,将裸鼠随机分为2组,命名为实验组(转染过表达慢病毒ANXA10)、空白对照组(PBS组)。实验组每只裸鼠给予过表达慢病毒ANXA10量为2×10~7TU(100ul),空白对照组每只裸鼠给予100ul浓度为0.01mol/L的PBS;3h后再次注射一次。4周以后采用拖颈方式处死16只裸鼠,并取出裸鼠皮下瘤体。采用免疫组化检测部分差异基因的表达水平。结果:1、重组慢病毒ANXA10对人肝癌细胞株HepG2的数字基因表达谱有影响,通过对生物信息的分析,实验组与空白对照组比较,共有118个基因表达上调,12个基因表达下调。2、荧光定量PCR技术检测结果显示,实验组与空白对照组比较,实验组中VEGF、NDRG1、ATG4bmRNA表达明显下调,而HIF-1α mRNA表达上调,差异有统计学意义(P<0.05),与DGE的分析结果一致。3、免疫组化检测裸鼠皮下移植瘤结果显示:实验组较空白对照组的VEGF、NDRG1、ATG4b蛋白质表达明显下调;而HIF-1α蛋白质表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.05),与qPCR分析结果一致,进一步证实HIF-1α、VEGF、NDRG1、ATG4b在转染过表达慢病毒ANXA10的HepG2细胞和HepG2细胞的差异表达。结论:1、过表达ANXA10基因对人肝癌细胞株HepG2基因表达谱有影响。2、过表达ANXA10基因对人肝癌发生、发展相关的细胞因子VEGF、NDRG1、ATG4b可能存在抑制效应,HIF-1α可能存在促进效应。
其他文献
银行效率是很多经济学家关注和研究的主要问题之一,同时各银行经营管理者也非常重视。银行效率的高低既是银行经营绩效的体现,也能体现出银行的综合竞争力,提高银行效率和有效控
<正> 2002年7月份的一天,我到郴州市的一家综合农贸市场办事,办完事正准备回家,偶尔看到一家个体摊位上摆有现榨现卖的农家自酿糊汁酒,我随便问了一下价格,没想到这种仅仅只
现代汉语中,语序是重要的语法手段之一。也是对外汉语教学的难点。日本留学生在汉语语序方面出现的偏误较多,本文以北京语言大学“HSK”动态作文语料库为语料来源,运用中介语、
自从20世纪90年代以来,产业集群作为一种世界性的经济现象,其对某一地区乃至国家经济发展的强大促进作用,引起了广大学者的关注和研究。随着旅游业在全世界范围内的迅速发展,在一
<正>同志们: 今天,教育党委以“今天怎样做书记”为主题,隆重纪念中国共产党成立80周年,这是很富有特色的纪念活动。近两年来,教育系统连续组织开展了“今天怎样做老师”、“
二战以来,美国经历了数次科学课程改革,科学课程逐步走向成熟。我们在迅速借鉴和跟进美国小学科学课程经验上,多是从技术层面对其科学课程目标、标准、内容、教材以及实施等
中国仲裁司法审查制度的不完善,实践中司法对于仲裁仍保有的怀疑与敌视态度,引致对于仲裁的不当监督与制约,使中国海事仲裁发展空间受到了极大的挤压。从海事仲裁司法审查的
以往对于决策偏好的可变性研究,国内学者主要集中于通过改变诱导信息和反应模式来进行,对于通过改变评估模式来研究人们的偏好,国外已有相当丰富的研究,但是大多都是通过改变
<正>未折叠蛋白反应(UPR,unfolded protein response)和内质网应激在维持免疫系统稳态中的作用并未完全知晓。本文作者发现树突状细胞,在未发生ER stress的情况下,持续激活未
井上靖是日本杰出且高产的作家、诗人、评论家。他为文学创作奉献了一生,创写出了大量的小说、诗歌、文学评论等。其作品中小说的艺术价值被公认为最高。特别是他创作的中国历