维生素E(Trolox)在人精子冻融中氧化应激保护作用的初步研究

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背景:近年来,男性不育症的发病率呈现出逐渐上升的趋势,辅助生育技术(assisted reproductive technology, ART)已经成为男性不育症治疗的重要手段,而精液冷冻保存是ART中不可缺少的环节。精液冷冻复苏中过程中产生的大量活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS),是导致冻融后精子活力下降的重要原因。维生素E可保护细胞膜内的多聚不饱和脂肪酸免受ROS氧化,在细胞的抗脂质过氧化损伤中发挥了重要的作用。目前甘油复合型冷冻保护液是应用最为广泛和成熟的冷冻保护液,本研究拟通过在冷冻保护液中添加不同浓度的水溶性维生素E (Trolox),探讨其对冻融复苏人精子氧化应激损伤是否存在保护作用,从而达到改良人精液冷冻保护液的最终目的。目的:观察人精液冻融后产生的活性氧以及脂质氧化终产物丙二醛(Malondialdehyde, MDA)浓度,测定冻融前后精子活力活率以及动力学参数,探讨水溶性维生素E(Trolox)对冻融人精子氧化应激损伤的可能保护作用及机制。方法:选取16份健康可生育男性的精液标本,采用计算机辅助精液分析系统(computer-assisted semen analysis, CASA)分析精液常规参数及动力学参数后,将每份精液等分为四份,以冷冻保护液中未添加维生素E者设为阴性对照组(GO),而G1、G2、G3实验组冷冻保护液中分别添加含有50uM,100uM,200uM浓度的水溶性维生素E (Trolox),冷冻复苏后再次采用CASA分析精液常规参数及动力学参数,应用流式细胞仪检测精浆活性氧水平,采用硫巴比妥酸法(Thibabiturci accid, TBA)检测精浆中精子膜脂质过氧化产物MDA浓度,并检测实验组与阴性对照组之间在ROS浓度、MDA生成量以及精子活力、活率以及动力学参数方面是否存在差异。结果:冻融后各组精子活力及参数较新鲜精液参数均明显下降(P<0.01),但添加100uMTrolox组(53.33±5.63%)精子活力下降少于阴性对照组(47.85±5.09%)(P<0.05),同时精液动力学参数(VCL,VAP)等高于阴性对照组(P<0.05)。而添加Trolox100μM组与200uM组的ROS及MDA均低于阴性对照组,P小于0.05。结论:在精液冷冻保护液中添加一定浓度的水溶性维生素E可以减少精子冻融过程中产生的过量ROS,减轻ROS对精子质膜的氧化应激性损伤,从而提高冻融后的精子活力。
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